抗原與免疫血清的制備實驗

動物產生抗體的量，一方面可因動物的種類、年齡、營養狀況及刺激部位的感受性的不同而不同外，另方面還與抗原的種類、注射量、注射途徑、注射次數以及注射的間隔時間有關。

抗原量低到一定限度時，抗體不能產生或用現有方法不能測出，但超過最高限度對抗體的產生反起抑制作用。在最低限度以上，抗體根據抗原量的增加而增加，達到最高限度時，即不再增加。每種類型的抗原，其使用量都是根據經驗而得出的。本實驗的抗原是細菌細胞，采用每毫升中含 9 億個細菌，比較恰當。抗原初次注射后，經一段誘導期，血清內即可找到抗體，以后逐漸上升，抗體量一般不高，然后逐漸下降。但再次注射時，抗體量迅速上升到最高水平，而且維持時間也長。因此，制備抗體一般需要多次注射抗原，才能得到高效價的免疫血清。注射途徑最常用的是靜脈。

24 h 培養的大腸桿菌斜面2 kg 左右的健康雄家兔或未孕的健康雌家兔

硫柳汞0.5％ 石炭酸生理鹽水

McFarland 比濁管乙醇棉花碘酒棉花消毒干棉花滅菌吸管毛細滴管小試管大試管離心管2 ml 和 20 ml 注射器老編號 18 號與 24 號針頭滅菌細口瓶離心機

1. 抗原的制備

1.1 吸取滅菌的 0.5％ 石炭酸生理鹽水 5 ml，注入大腸桿菌斜面培養物上，將菌苔洗下。

1.2 用無菌毛細滴管吸取洗下的菌液，注入無菌小試管。

1.3 將此含有菌液的小試管放 60℃ 的水浴箱中 1 h，并不時搖動。

1.4 取一與比濁管同質量的小試管，加菌液 1 ml，再加石炭酸生理鹽水 4 ml（或更多，視原菌液濃度而定），混勻后與各比濁管比濁。假若與第 3 管的濁度相等，則此菌液每毫升的細菌數為：

5×900 000 000＝4 500 000 000（45 億）

附 McFarland 比濁管配制法 用同質量同大小的試管 10 支按下表加入藥品。

1.5 稀釋

用 0.5％ 石炭酸生理鹽水將菌液稀釋至每毫升含 9 億個細菌。

1.6 無菌試驗

將已稀釋好的菌懸液接種少量于肉湯培養基內，培養 24～48 小時，觀察有無細菌生長，如無細菌生長，即可放冰箱備用。

2. 免疫血清的制備

2.1 注射動物

2.1.1 用消毒注射器和 7 號針頭抽取以上制備好的大腸桿菌抗原（抽取前搖勻），按下表所列劑量與日程注射家兔耳靜脈。

2.1.2 第 14 日 自耳靜脈采血 1 ml，分離血清，測其凝集效價，如合格即即可大量采血。

2.1.3 第 16 日 采血。

2.2 家兔心臟采血（見「動物采集血液實驗」）

2.3 制備血清

2.3.1 采集的血液移入滅菌大試管（或平皿）后，盡量放成最大斜面，凝固后放人 4～6℃ 冰箱中，使其自然析出血淸。

2.3.2 用已滅菌的毛細滴管分出血清，若血清中帶有紅細胞，則須離心沉淀以去掉紅細胞。然后將血清裝入滅菌細口瓶中，并測定抗血清的效價。

2.3.3 加入防腐劑，使血清含有 0.01％ 硫柳汞。

2.3.4 用蠟或膠帶紙封瓶口，貼上標簽，注明抗血清名稱，凝集效價及日期，放冰箱備用。