染性疾病動物模型2

基 本 方 案 1 全 身 性 感 染 LCM V 小鼠模型

材 料

已知滴度的 L C M V 病 毒 株（見輔助方案 1 和 2)

P B S

適當品系小鼠，滿足統計學意義所需的數量。

麻 醉 劑（如氯胺酮/甲苯噻嗪；附 錄 2D )

1 ml Luer打鎖緊套口注射器（一次性注射器）， 25G? 27G針 頭

I. 37°C 水浴融化病毒凍存液后立即置于冰上，采用以下方法感染動物后應該依照生物安全標準舍棄不可用的病毒凍存液，不可反復凍融。

腹腔內注射感染

依照上述方法將 IO?I O ⁶ P f i I 的 L C M V 腹腔注入小鼠體內，引起除腦之外的全身性感染，但病毒通常在感染 7?I O d 內 被 清 除 ，大劑量注射會導致體內免疫耗竭而延遲病毒的清除。

2a. 稀釋病毒溶液，注意控制注入每個小鼠體內的體積在 0.1?0.2m l 。

3a. 用 I m l 注射器吸取所需量的病毒液，之后再裝上 25 G ?27 G 針頭，冰上保存待用。

注意：不要用蓋上針頭的注射器吸病毒液，不符合安全要求。

4a. 小鼠腹膜內注射病毒液（附 錄 2E )。

盡 管 沒 有 規 定 實 驗 開 始 之 前 必 須 進 行 麻 醉 ，但 是 出 于 安 全 的 考 慮 ，建 議 對 所 要操 作 的 動 物 進 行 麻 醉 。

靜脈注射

如果希望快速建立全身性病毒感染及建立宿主免疫抑制和持續感染，需通過靜脈注射（IO?10⁵pfu) L C M V 病毒，才可引發小鼠的全身性感染。但 若 大 于 IO5 會導致持續 的 感 染 或 「耗竭」免疫反應。

2b. 稀釋病毒溶液，控制注入小鼠靜脈內的體積在0.05?0.1m l 。

3b. 用 I m l 注射器吸取所需量的病毒液，之后再裝上 27 G 針頭，冰上保存待用。

4b. 小鼠靜脈內注射病毒液（附 錄 2E )。

足墊接種和皮下注射感染

足墊接種和皮下注射的劑量和產生的結果相似。足墊接種時，只 需 要 I O 2 P f u 的L C M V 就可引起小鼠全身性感染，病毒溶液通過局部淋巴結迅速擴散并引起較強的抗病毒免疫反應，其特征為足墊腫脹。

2c. 稀釋病毒溶液，控 制 注 入 小 鼠 靜 脈 內 的 體 積 在 0.1?0.2 ml (皮下）或 10?50ul(足墊）。

3c. 用 I m l 注射器吸取所需量的病毒液，之后再裝上 25 G ?27 G 針 頭 ，冰上保存待用。

4c. 小鼠足墊接種和皮下注射毒液（附 錄 2E )。

顱內接種

腹腔注射、靜脈注射、足墊接種和皮下注射往往不產生腦內感染。然 而 ，直接顱內接種導致大腦和脈絡叢腦膜炎后， 9 8 % ?1 0 0 % 的小鼠在感染后 6?9d 死于脈絡叢腦膜炎（病毒由此而得名）。致死原因是機體產生抗 L C M V 病毒的免疫病理反應而非病毒對細胞的直接病理作用（Dixon ， 1987)。對 L C M V 已產生免疫力的動物，顱內感染可以大大減少免疫病理反應，而提高動物的存活率（見基本方案 4 中 L C M V 接種）。故
顱內注射的方法常用于疫苗研究及抗病毒免疫效果評估。

2d. 稀釋病毒溶液，控制注入小鼠顱內最大注射體積 50ul 中 含 1?50pfu 的病毒。

3d. 用 I m l 注射器吸取病毒溶液，之后再裝上 27 G 針頭，冰上保存待用。

4d. 氯胺酮/甲苯噻嗪麻醉小鼠（附 錄 2D )。

5d. 注意進針深度，用刀片切割針帽，使 針 尖 距 針 帽 2m m 左右 ，安裝帽時特別注意，因為針頭已沾有病毒溶液。

6d. 四指固定小鼠頭部，從眼眶近背部進針 5m m 入 顱 內（此處為骨聯合處，進針深度容易控制）慢進慢出，大 約 5m i n 后小鼠從麻醉中蘇醒過來，每天進行觀察， 5?9d之內不更換飼養籠。

每 一 個 病 毒 株 都 要 仔 細 地 測 定 L D 5。滴 度 。

基 本 方 案 2 LCM V 病毒持續感染小鼠模型

材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)

已知滴度的 L C M V 病 毒 株（見輔助方案 1 和 2)

P B S

懷孕小鼠

Iml —次性注射器， 27 G 針頭

1 . 監控懷孕小鼠直到生產。

2 . 新生小鼠出生 24 h 內，腹腔接種 30W 含 IO3 Pfu 病 毒 的 P B S 液（基本方案 1)。

3 . 小鼠生長至 4 周時，用血清空斑形成試驗檢測小鼠血清以證實持續感染成功（見輔助 方 案 2)。

持 續 感 染 成 熟 小 鼠 ，可 使 病 毒 通 過 胎 盤 傳 染 給 胎 兒 以 獲 得 持 續 感 染 的 小 鼠 ，但這 樣 要 花 費 大 量 的 時 間 尋 找 符 合 要 求 的 成 鼠 ，而 且 喂 養 小 鼠 也 需 要 在 達 到 B L -2 級的實 驗 室 中 進 行 。 另 外 免 疫 抑 制 的 小 鼠 也 可 用 來 做 持 續 感 染 的 動 物 模 型基 本 方 案 3 T 細 胞 對 LCM V 免疫反應的測定