白細胞介素-2（IL-2）是由活化的輔助性T細胞分泌的一種細胞增殖因子，具有促T細胞增殖和維持T細胞體外長期生長的作用。CTLL-2為IL-2依賴細胞株可用作IL-2生物學活性定量檢測。本實驗采用MTT分析法，通過測定CTLL-2細胞的增殖量，確定IL-2生物學活性單位。檢測IL-2的生物學活性，可以間接了解輔助性T細胞的功能。
| 實驗材料 | 人外周血T細胞 |
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| 試劑、試劑盒 | FCS-RPMI-1640培養液谷氨酰胺HEPES青霉素鏈霉素PBSA緩沖液 |
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| 儀器、耗材 | 離心機分光光度計搖床 |
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| 實驗步驟 | 一、人外周血T細胞分泌IL-2的誘生
1. 人PBMC分離：采用常規淋巴細胞分層液濃度梯度離心法分離PBMC，用10%FCS-RPMI-1640培養液調整細胞濃度為
2. 加樣：接種細胞懸液于24孔培養板，每孔0.51 ml，每孔再加PHA 0.5 ml，37度，5%CO2孵育48小時。
3. 回收上清：吸出細胞培養上清，12000 r/min 離心15分鐘，收集上清，-20度凍存。
二、IL-2生物活性測定
1. CTLL-2細胞制備：取傳代培養24~48小時對數生長期的CTLL-2細胞，用培養液離心洗滌2次，每次1000 r/min 離心5分鐘，再用10%FCS-RPMI-1640培養液調制細胞濃度為1×105/ml。
2. 加樣：將細胞接種于96孔培養板，每孔0.1 ml。同時將待測樣品和標準品做倍比稀釋，每孔加入0.1 ml，每個稀釋濃度均設3復孔。另設培養液對照孔（100 ul 細胞+100 ul 培養液）。37度，5%CO2孵育40小時。
3. MTT摻入：輕輕吸取上清液100 ul，加MTT（1 mg/ml）100 ul，37度，5%CO2孵育2小時。
4. 測定：離心培養板，2000 r/min，5分鐘，吸棄上清液，每孔加100 ul DMSO，作用30分鐘，用酶標測定儀于波長570 nm 測吸光值（A）。
5. 計算：用標準品濃度和對應的凈A570 nm 值（實驗孔-陰性對照孔的A570 nm值）繪制標準曲線。根據標準曲線求出待測樣品IL-2水平。
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| 注意事項 | 1. CTLL-2細胞存活率應大于95%。
2. 因標本中含IL-4等，可影響IL-2的測定，最好采用抗IL-4 mAb吸附劑除去IL-4。
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