微生物分離純化實驗——平板劃線分離法

該方法操作簡便，普通用于微生物的分離與純化。

其基本原理包括兩方面：

1. 選擇適合于待分離微生物的生長條件，如營養、酸堿度、濕度和氧等要求或加入某種抑制劑造成只利于該微生物生長，而抑制其他微生物生長的環境，從面淘汰一些不需要的微生物。

2. 微生物在固體培養基上生長形成的單個菌落可以是由一個細胞繁殖而成的集合體。因此可通過挑取單菌落而獲得一種純培養。獲取單個菌落的方法可通過稀釋涂布平板或平板劃線等技術完成。

米曲霉土樣

10％ 酚無菌水鏈霉素

玻璃涂棒試管無菌三角瓶玻璃珠無菌吸管接種環無菌培養皿顯微鏡記號筆血細胞計數板

1. 倒平板

按稀釋涂布平板法倒平板，并用記號筆標明培養基名稱、土樣編號和實驗曰期。

2. 劃線

在近火焰處，左手拿皿底，右手拿接種環，挑取上述10^-1的土壤懸液一環在平板上劃線（見圖 VII-5）。劃線的方法很多，但無論采用哪種方法，其目的都是通過劃線將樣品在平板上進行稀釋，使之形成單個菌落。

常用的劃線方法有下列二種：

①用接種環以無菌操作挑取土壤懸液一環，先在平板培養基的一邊作第一次平行劃線 3～4 條，再轉動培養皿約 70° 角，并將接種環上剩余物燒掉，待冷卻后通過第一次劃線部分作第二次平行劃線，再用同樣的方法通過第二次劃線部分作第三次劃線和通過第三次平行劃線部分作第四次平行劃線（圖 VII-6，A），劃線完畢后，蓋上培養皿蓋，置于溫室培養。

②將挑取有樣品的接種環在平板培養基上作連續劃線（圖VII-6，B）劃線完畢后，蓋上培養皿蓋，倒置于溫室培養。

3. 挑菌落

同稀釋涂布平板法，一直到分離的微生物認為純化為止。

值得指出的是從微生物群體中經分離生長在平板上的單個菌落并不一定保證是純培養。因此，純培養的確定除觀察其菌落特征外還要結合顯微鏡檢測個體形態待征后才能確定，有些微生物的純培養要經過一系列的分離與純化過程和多種特征鑒定方能得到。