支原體的分離培養鑒定

細菌樣本

支原體分離鑒定培養液

恒溫培養箱培養管離心機

【標本采集】標本采集后應立即送檢，室溫保存不超過2小時，2—8℃保存不超過5小時。

男性：用男性無菌拭子插入尿道口內2—4cm處輕輕旋轉取分泌物；也可取前列腺液或精液培養。必要時也可用尿液作支原體培養，取清晨第1次尿的中段尿10—20ml，經2000rpm離心10分鐘，取沉渣接種，但尿液支原體培養陽性率明顯低于尿道分泌物。

女性：用擴陰器擴陰后，用女性拭子在宮頸口內1—2cm處輕輕旋轉取宮頸分泌物；也可用羊水培養。不推薦用尿液。

【培養】

1、培養管復溫取出所需要數量的培養管，復溫至室溫，作好標記。

2、接種將拭子插入培養管，旋轉并擠壓數次，使拭子中支原體滲入液體中，拭子經滅菌處理后妥善處理；尿液沉渣、精液、羊水、前列腺液等液體標本取0.2ml接種培養液，充分混勻。

3、培養35—37℃恒溫培養24—48h小時，觀察結果。

1、Uu 、Mh生長應保持培養液透明清亮，無明顯渾濁，偶遇渾濁者不得報支原體陽性。

2、Uu生長，培養液正常變色時間在24小時內，但如果標本含量少時，變色時間可能超過24小時。Mh生長，培養液正常變色時間在24—48小時之內，如果標本含量較大時，變色時間可能會小于24小時。

3、不能確定有無雜菌污染時，可將培養液取出少許接種于血平板或通過0.45um濾膜過濾培養，根據血平板菌落生長或過濾后培養的顏色變化來判斷雜菌污染。

結果判定： Uu應在24小時內報告，Mh應在48小時內報告，其他結果在48小時內報告，最長不超過72小時。培養管液體由橙色變紅色，透明清亮，無明顯渾濁，表明有Uu和（或）Mh生長，可判為陽性；培養管液體無任何變化，可報陰性結果；培養液明顯渾濁變紅者，應判無支原體生長。必要時可做支原體固體培養，低倍鏡下觀察有荷包蛋樣菌落生長者為支原體陽性。