實驗方法原理 | 不同大小和比重的粒子在沉降速度上存在差別,沉降速度差別(相差)在一個或幾個數量級的粒子,可用本法分離提取。 |
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實驗材料 | 待純化的病毒 |
試劑、試劑盒 | 無 |
儀器、耗材 | 差速離心機 |
實驗步驟 | 將被分離的樣品交替進行低速離心與高速(或超速)離心。差速離心適用于從組織培養液、雞胚尿囊液或經過紅細胞吸附-釋放的病毒懸液中提純病毒。在由感染細胞或組織勻漿中提取病毒時,由于與病毒大小相近的細胞亞單位及碎片的存在,提純效果不理想。 以差速離心法分離提純病毒時,經常以低速 (2 000~3 000 r/min, 20~30 min) 及中速(10 000 r/min,20~30 min) 去除較大的宿主細胞碎片、污染的細菌及其它較大的雜質。然后,選擇在 60 min 內能夠沉淀 80% 以上的病毒粒子的較高速度,離心 1~2h使病毒沉淀。 |
注意事項 | |
其他 | 差速離心法的優點是能迅速處理大量樣品,故常作為病毒精制的第一個階段,或者用于病毒樣品的濃縮和粗提。 |