1. 接種步驟與方法
(1) 取 5-8 日齡雞胚(此時期卵黃囊大,易接種,且有較大的表面積供病原體繁殖),于檢卵燈上劃出氣室和胚胎位置,垂直放置在卵架上,鈍端朝上,并用 2. 5%碘酒和 75% 酒精消毒氣室端。
(2) 用開孔器在氣室中央的卵殼上鉆一小孔,勿損傷殼膜,用帶有 6 號針頭的 1 ml 注射器將樣品從小孔處沿胚的縱軸迅速刺入約 3 cm, 注入 0. 2-0. 5 ml 待接種的病毒于卵黃囊內, 隨后用膠帶或溶化的石蠟封孔。
(3) 置孵化箱內繼續孵育 3-8 d,時間長短應根據病毒或立克次體的種類而定,每天翻卵 2 次,棄掉 24 h 內死亡的雞胚(但東方型和西方型馬腦炎可能在接種后 15-24 h 內死亡)。
2. 解剖與收獲
(1) 收獲時,雞卵預冷,用 2.5% 的碘酒和 75%酒精消毒氣室端的卵殼,用剪子去掉氣室上的卵殼,除去殼膜后,用鑷子將卵黃囊與絨毛尿囊膜分開。
(2) 取一把滅菌鑷子夾出卵黃囊(黃色容易辨認)放在滅菌平皿中,必要時用生理鹽水沖去卵黃。也可將全部內容物傾入平皿中,然后剝出卵黃囊。
(3)將不帶卵黃的膜放在無菌平皿或燒杯中,以便用于染色檢查或進行傳代。對某些病毒的
分離則要收集全部胚體。 展開 |