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  • 發布時間:2019-04-08 22:33 原文鏈接: 病毒的雞胚培養_卵黃囊接種

    實驗方法原理卵黃囊接種法主要用于蟲媒病毒、衣原體及立克次體等的分離和繁殖。這些大的病原體主要在卵黃囊的內皮細胞生長,且生長速度很快,立克次體在染色后也可看到。
    實驗材料

    雞胚

    試劑、試劑盒

    消毒劑 (2. 5% 碘酒和 75% 酒精)

    儀器、耗材

    檢卵燈照明燈卵杯卵盤雞胚開孔器等

    實驗步驟


    1. 接種步驟與方法


    (1) 取 5-8 日齡雞胚(此時期卵黃囊大,易接種,且有較大的表面積供病原體繁殖),于檢卵燈上劃出氣室和胚胎位置,垂直放置在卵架上,鈍端朝上,并用 2. 5%碘酒和 75% 酒精消毒氣室端。


    (2) 用開孔器在氣室中央的卵殼上鉆一小孔,勿損傷殼膜,用帶有 6 號針頭的 1 ml 注射器將樣品從小孔處沿胚的縱軸迅速刺入約 3 cm, 注入 0. 2-0. 5 ml 待接種的病毒于卵黃囊內, 隨后用膠帶或溶化的石蠟封孔。


    (3) 置孵化箱內繼續孵育 3-8 d,時間長短應根據病毒或立克次體的種類而定,每天翻卵 2 次,棄掉 24 h 內死亡的雞胚(但東方型和西方型馬腦炎可能在接種后 15-24 h 內死亡)。


    2. 解剖與收獲


    (1) 收獲時,雞卵預冷,用 2.5% 的碘酒和 75%酒精消毒氣室端的卵殼,用剪子去掉氣室上的卵殼,除去殼膜后,用鑷子將卵黃囊與絨毛尿囊膜分開。


    (2) 取一把滅菌鑷子夾出卵黃囊(黃色容易辨認)放在滅菌平皿中,必要時用生理鹽水沖去卵黃。也可將全部內容物傾入平皿中,然后剝出卵黃囊。


    (3)將不帶卵黃的膜放在無菌平皿或燒杯中,以便用于染色檢查或進行傳代。對某些病毒的


    分離則要收集全部胚體。

    展開


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