1. 噬菌體的檢查：
① 樣品采集
將2——3g土樣或5mL水樣（如陰溝污水）放入滅菌三角瓶中，加入對數生長期的敏感指示菌（大腸桿菌）菌液3——5mL，再加20mL二倍肉湯蛋白胨培養液。
② 增殖培養
30℃振蕩培養12——18h, 使噬菌體增殖。
③ 離心分離
將上述培養液以3000rpm離心15——20min，取上清液，用pH7.0，1%蛋白胨水稀釋至10-2——10-3，用于噬菌體檢查及效價測定。
④ 生物測定法：
雙層瓊脂平板法；
倒下層瓊脂，融化下層培養基，倒平板（約10mL/皿）待用。
倒上層瓊脂
融化上層培養基，待融化的上層培養基冷卻至50℃左右時，每管中加入敏感指示菌 （大腸桿菌） 菌液0.2mL，待檢樣品液或上述噬菌體增殖液0.2——0.5mL，混合后立即倒入上層平板鋪平。
恒溫培養：30℃恒溫培養6——12h觀察結果。
觀察結果：如有噬菌體，則在雙層培養基的上層出現透亮無菌圓形空斑噬菌斑。
單層瓊脂平板法
省略下層培養基，將上層培養基的瓊脂量增加至2%，融化后冷卻至45℃左右，如同上法加入指示菌和檢樣，混合后迅速倒平板。30℃恒溫培養6——16h后觀察結果。
⑤ 離心分離加熱法（快速檢查）
取大腸桿菌正常培養液和侵染有噬菌體的異常大腸桿菌培養液，4000rpm離心20min，分別取兩組發酵液的上清液（A1），一部分于721分光光度計上測定OD650光密度值，另外各取5mL上清液于試管中，置水浴中煮沸2min（A2），檢測A2溶液OD650光密度值，記錄結果。
2. 噬菌體效價的測定：
① 倒平板
將融化后冷卻到45℃左右的下層肉膏蛋白胨固體培養基傾倒于11個無菌培養皿中，每皿約傾注10mL培養基，平放，待冷凝后在培養皿底部注明噬菌體稀釋度。
② 稀釋噬菌體
按10倍稀釋法，吸取0.5mL大腸桿菌噬菌體，注入一支裝有4.5mL1%蛋白胨水的試管中，即稀釋到10-1，依次稀釋到10-6稀釋度。
3. 噬菌體與菌液混合：
將11支滅菌空試管分別標記10-4、10-5、10-6和對照。分別從10-4、10-5和10-6噬菌體稀釋液中吸取0.1mL于上述編號的無菌試管 中，每個稀釋度平行做三個管，在另外兩支對照管中加0.1mL無菌水，并分別于各管中加入0.2mL大腸桿菌菌懸液，振蕩試管使菌液與噬菌體液混合均勻， 置37℃水浴中保溫5min，讓噬菌體粒子充分吸附并侵入菌體細胞。
4. 接種上層平板：
將11支融化并保溫于45℃的上層肉膏蛋白胨半固體瓊脂培養基5mL分別加入到含有噬菌體和敏感菌液的混合管中，迅速搓勻，立即倒入相應編號的底層培養基平板表面，邊倒入邊搖動平板使其迅速地鋪展表面。水平靜置，凝固后置37℃培養。
5. 觀察并計數：
觀察平板中的噬菌斑，并將結果記錄于 計算公式：N=Y/V%×X
（N：效價值，Y：平均噬菌斑數／皿，V：取樣量，X：稀釋度） 展開 | 