1. 制備細胞。
先制備好單層細胞培養物，在低倍顯微鏡下觀察，挑選生長良好的細胞，按「傳代細胞培養」法進行，將細胞單層洗滌、消化、計數。配制所需濃度的細胞懸液，細胞數目可因細胞種類而異，通常為 20 萬 -30 萬/ml。預先將微量細胞培養板設計好，標記；用微量加樣器將細胞懸液加人微孔中，每孔 200μl。
2. 孵育細胞。
將裝有細胞懸液的微孔板置于 5% CO2 培養箱中， 37℃培養直至細胞生長成良好的單層。
3. 接種病毒。
用含 2%小牛血清的 Eagle's 維持液作為稀釋液，將待測病毒作連續 10 倍稀釋，如 10-1 、 10-2 、 10-3 …… 10-10 等。將培養板中的培養液全部傾棄，用微量加樣器把每個稀釋度的病毒液依次、對號加入各個微孔，每孔 100μl, 每個稀釋度加 4 孔，同時設細胞對照孔 4 孔，不加病毒，只加稀釋液，置于 37℃ 5% CO2培養箱中培養。
4.觀察結果。
于培養后的不同時間，如 18 h 、 24 h 、 36 h 等，在倒置顯微鏡下觀察細胞病變情況。表示細胞病變程度。 通觀整個「單層區」，權衡總的情況，以下列符號表示其病變程度：
-：表示無細胞病變。
+：表示 1%——25% 的細胞有病變。
++: 表示 26%——50% 的細胞有病變。
+++：表示 51%——75% 的細胞有病變。
++++: 表示 76%——100% 的細胞有病變。
5.記錄結果。
病毒引起細胞病變效應的滴度以半數細胞培養感染量 （50% cell culture infectious dose, CCID50）表示，即凡能使 50%（半數）細胞出現病變的最高病毒稀釋度，即為 50%感染單位，簡稱 CCID50。有時也稱其為半數組織培養感染量 （50 % tissue culture infectious dose, TCID50） 。細胞病變效應出現的時間，不同病毒不完全一樣，以感染細胞的病變不再發展，而對照細胞仍完好為準。
6.計算。
（1）CCID50的計算
Reed-Muench 法計算CCID50（圖片插入http://res.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2017/08/B15022615761176i7hmtaq3r.png）
Karber 法計算 CCID50
公式： lg CCID50< 或 LD50 、 ID50）=L+d（S- 0. 5）
L—病毒的最低稀釋倍數的對數；
d—稀釋系數，即組距；
s---細胞病變比值的和（不包括最低稀釋度細胞病變的比值）。
圖片插入：http://res.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2017/08/B15022616615769hmgu53nbg.png
（2）ID50 和 LD50的計算
ID50的計算與CCID50完全相同，但依接種動物或胚胎是否受感染而判定，感染與否的判定標準如家兔在接種豬瘟病毒之熱反應，雞胚胎接種新城疫病毒后血球凝集。
LD50計算方法與前兩者完全相同，只是判定標準是以接種動物或胚胎是否死亡判定的。
（3）CCID50 與 PFUs 的換算
如果用同一細胞系做 CCID50試驗和空斑形成單位 （PFUs） 試驗， 1 ml 病毒液將會產生的PFUs 約相當于 CCID50 滴度的一半。此時的感染量為至少在單層細胞上出現 1個病毒空斑。而實際測量時，在單層細胞上可能出現 1個以上的病毒空斑，因此需要按實際測量的空斑數計算。若按數學公式推導，預期的 PFUs 將會超過 CCID50 滴度的一半。因為在 CCID50測量時，陰性代表在單層細胞上出現的空斑數為 0, 陽性代表在單層細胞上出現 1個或 1個以上的空斑。
按照泊松分布的公式 P（O） =e（-m），P（O） 代表陰性孔數的比例， m 代表 PFUs/ml, 因為任何CCID50的 P（O）=0.5，因此， e（-m） =0. 5,m= —ln 0. 5≈0. 7 。所以 0. 7 乘以CCID50的滴度即為預計的 PFUs 。 展開 | 