微生物法
| 驗材料 | |
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| 試劑、試劑盒 | |
| 儀器、耗材 |
藥物-機體相互作用一方面是藥物對機體的作用，產生藥效、毒性或副作用，表現為藥物的藥理作用或毒理作用，決定于特定的化學結構，具有較強的結構特異性。另一方面是機體對藥物的作用：吸收、分布，生物轉化和排泄，表現為藥物的藥代動力學性質。
主要取決于藥物的溶解性、脂水分配系數、電荷等藥物分子整體的理化性質，結構特異性不強。 藥代動力學是應用數學模型和計算公式闡明藥物的體內過程隨時間而改變的量變規律，從而揭示藥物在體內的位置（房室）、濃度與時間的關系。
實驗目的
1，掌握微生物法測定羅紅霉素血藥濃度的基本原理與操作。
2，熟悉相對生物利用度的測定。
3，了解羅紅霉素的動物藥代動力學研究過程。
實驗材料
1， 動物
健康犬12只，♂，體重12kg左右，由安徽醫科大學實驗動物中心提供（皖醫實動準第01號）。
2 ，藥品
羅紅霉素片，商品名羅邁新，麗珠集團麗珠制藥廠，規格150mg/片，批號020602。
羅紅霉素片，商品名浦虹，上海醫藥工業研究院亞東藥業公司浦東藥廠，規格150mg/片，批號020601。
羅紅霉素標準品，含量949.5（u/mg），批號020205M。
3 ，檢定菌
藤黃微球菌標準菌株CMCC（B）28001，衛生部藥品生物制品檢驗所提供。
4， 試劑
磷酸鹽緩沖液（pH6.0），安徽醫科大學第一附屬醫院檢驗科臨床微生物室配制，過濾，115℃高壓30分鐘。
培養基Ⅱ，安徽醫科大學第一附屬醫院檢驗科臨床微生物室配制，過濾，115℃高壓30分鐘。
營養瓊脂干粉，杭州天和微生物試劑廠，按其說明書配制，用于轉種藤黃微球菌標準菌株和細菌菌落計數。
實驗方法
1，標準曲線制備
將已高壓滅菌的培養基Ⅱ加熱溶解后傾入無菌培養皿，藤黃微球菌標準菌株菌液（104-105CFU/ml）均勻涂抹無菌培養皿，置35℃溫箱10-20分鐘。用直徑為3.5mm打孔器在培養皿打2孔，用于加入標準品及血漿樣品。
精密稱取羅紅霉素標準品50mg，用1ml無水乙醇溶解后，加入4mlPH6.0磷酸鹽緩沖液，制成儲備液（1000 mg·l-1）。
取0.1ml儲備液加入9.9mlPH6.0磷酸鹽緩沖液，制成中間液體（100 mg·l-1），用犬血漿稀釋成10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625mg·l-1，取20ul加入上述孔中，置35℃溫箱16小時，用游標卡尺測量抑菌環直徑（mm）。
以抑菌環直徑D為橫坐標，濃度C（mg·l-1）的對數為縱坐標繪制標準曲線，回歸方程為：lgC=-1.219+0.083D，r =0.9958。
2， 回收率試驗
分別制備高、中、低3種濃度的羅紅霉素血漿樣品，按標準曲線制備項下方法操作，將抑菌環直徑代入標準曲線計算羅紅霉素濃度，以測得值與加入值之比計算回收率。
3， 精密度試驗
分別制備高、中、低3種濃度的羅紅霉素血漿樣品，按標準曲線制備項下方法操作，1日內連續測定5次，計算日內相對標準差；將制備的高、中、低3種濃度的羅紅霉素血漿樣品連續測定5日，計算日間相對標準差。
4， 藥動學試驗方案
12只犬隨機分為2組，每組6只，用藥前禁食12小時，用藥后禁食4小時，禁水2小時。供試藥物組與對照藥物組分別灌胃浦虹、羅邁新2片（150mg×2），分別于0h（給藥前）及給藥后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、12、18、24、36、48、60、72h。
采血3ml，血標本收集于一次性肝素抗凝的負壓真空采血管（成都瑞琪C.D.RICH產品，批號020313）內，離心（3000r?min-1，10min）分離出血漿，血漿樣品保存于-20℃待測。血藥濃度測定方法同標準曲線。
5， 數據處理
血藥濃度-時間數據采用3p87藥代動力學軟件計算。峰濃度（Cmax）和達峰時間（Tmax）為實測值，對浦虹和羅邁新的主要藥代動力學參數采用配對t檢驗進行統計分析，以羅邁新藥時曲線下面積為標準，計算浦虹的相對生物利用度。
