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  • 發布時間:2019-04-13 12:41 原文鏈接: 抗人球蛋白(coomb’s氏試驗)

    實驗方法原理抗人球蛋白試驗(coomb’s)分為直接試驗(直接反應)和間接試驗(間接反應)。直接試驗的目的是檢查紅細胞表面的不完全抗體,表面附有相應抗原的紅細胞與不完全抗體結合之后稱為致敏紅細胞.經鹽水洗滌過的致敏紅細胞在鹽水介質中不發生凝集,加入抗人球蛋白血清后則出現凝集,此即抗人球蛋白直接試驗陽性。
    實驗步驟

    方法一:

    1. 受檢紅細胞:取患者全血脫纖維蛋白(不可用抗凝血,因抗凝血可使陽性變陰性),然后用生理鹽水洗滌紅細胞3次,配成10%紅細胞懸液.

    2. 將抗人球蛋白血清(coomb’s血清)原液(己稀釋4倍保存的血清)及生理鹽水稀釋成 1:2、1:4、1:8、1:16……等倍數之血清,分別加入凹玻片內各一滴。

    3. 加入等量患者10%紅細胞懸液混勻,置室溫,15分鐘,觀察有無凝集以最高血清稀釋倍數之陽性結果報告之。

    方法二:

    1. 取3支試管按下表操作:


    2. 將2. 3管置37℃1小時,然后3管均用大量生理鹽水洗三次,配成10%紅細胞懸液。

    3. 取小試管四支,按表操作:


    4. 混勻后.置室溫3O分鐘,觀察結果,也可低速離心后觀察.

    5. 結果:

    若陽性對照凝集,鹽水對照及陰性對照均無凝集表示操作及試劑均無問題,然后觀察受檢管報告之.


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    注意事項

    1. 抗人球蛋白血清在制好后,需用陽性紅血球或致敏的Rh陽性“O”型紅血球鑒定,為陽性者方可使用。為此不必每次作試驗時作陽性,陰性對照.

    2. 作試驗時,在未知coomb’s血清前即發現紅細胞凝集,此多為冷凝集現象,此時應在37℃環境下作試驗,以排除冷抗體的存在.

    3. 洗滌紅細胞時,需用多量生理鹽水洗三次,以使血清蛋白充分洗凈才可排除其抑制陽性結果的因素.

    4. 自身免疫抗體分為二種,一為溫抗體,為IgG在室溫及37℃起反應。一為冷抗體,為IgM在0-4℃起反應.因此,必需按照溫度環境來作試驗.

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