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  • 發布時間:2019-04-17 16:21 原文鏈接: 超廣譜β內酰胺酶(ESBLs)檢測的篩選與確證試驗

     

    ESBLs是英文Extended-Spectrum β-lactamase的縮寫,中文意思是超廣譜β-內酰胺酶,它是當前抗生素出現的新的耐藥趨勢之一。
    目前大腸埃希氏菌(大腸桿菌)、肺炎克雷伯氏菌是最常見的產ESBLs菌株的細菌,其次,陰溝腸桿菌、粘質沙雷氏菌、弗勞地枸櫞酸菌、銅綠假單孢菌也可出現產ESBLs菌株的細菌
    肺炎克雷伯菌、產酸克雷伯菌和大腸埃希菌中ESBLs檢測的篩選與確證試驗
     

    方法初步篩選試驗表型確證試驗

    培養基

     

     

    Mueller-Hinton瓊脂

    Mueller-Hinton瓊脂

     

     

      
      

    微生物

    物紙片濃度

    頭孢泊肟 10μg 或

     

     

    頭孢他啶 30μg 或

     

     

    氨曲南  30μg 或

    頭孢噻肟 30μg 或

     

     

    頭孢曲松 30μg 

      (使用一種以上的藥物進行篩選將會提高檢測的敏感性)

    頭孢他啶      30μg

    頭孢他啶/克拉維酸  30/10μg

     

     

    頭孢噻肟      30μg

     

     

    頭孢噻肟/克拉維酸  30/10μg

     

     

      確證試驗需要同時使用頭孢噻肟和頭孢他啶,單獨和聯合克拉維酸的復合制劑)

    接種

     

     

      

    按標準紙片擴散法的規定進行

      

    按標準紙片擴散法的規定進行

     

     

    孵育條件



    孵育時間



      
      

    判讀結果

     

     

    頭孢泊肟的抑菌圈≤17mm

    頭孢他啶的抑菌圈≤22mm

     

     

    氨曲南的抑菌圈 ≤27mm

     

     

    頭孢噻肟的抑菌圈≤27mm

     

     

    頭孢曲松的抑菌圈≤25mm

    提示可能有ESBLs的產生

    2個藥物中有任何一個,在加克拉維酸后,抑菌圈直徑與不加克拉維酸的抑菌圈相比,增大值≥5mm時,判定為產ESBLs(如,頭孢他啶的抑菌圈=16mm;頭孢他啶/克拉維酸的抑菌圈=21mm)

     

     

    質控建議

    大腸埃希菌ATCC25922(見表3的質控范圍)

     

     

      肺炎克雷伯菌ATCC700603:

     頭孢泊肟抑菌圈9-16mm

      頭孢他啶抑菌圈10-18mm

      氨曲南抑菌圈 9-17mm

     

     

    頭孢噻肟抑菌圈17-25mm

     

     

    頭孢曲松抑菌圈16-24mm

    大腸埃希菌ATCC25922:所測試藥物聯合克拉維酸后的抑菌圈直徑與單藥抑菌圈相比,增大值≤2mm。

     

     

      肺炎克雷伯菌ATCC700603:

    頭孢他啶/克拉維酸抑菌圈直徑增大≥5mm;

    頭孢噻肟/克拉維酸抑菌圈直徑增大≥3 mm。

     

     

                        腳注
    a. 頭孢他啶/克拉維酸(30/10μg)紙片與頭孢噻肟/克拉維酸(30/10μg)紙片的制備:  使用克拉維酸1000μg/ml的原液(新鮮制備或者從-70℃冰凍中取出已分裝在小瓶中的),把10μl的克拉維酸加到頭孢他啶(30μg)和頭孢噻肟(30μg)的紙片上。在紙片貼于平板之前1個小時內,用微量加樣器把10μl原液加到頭孢他啶和頭孢噻肟紙片上,允許有30分鐘的時間以利于克拉維酸的吸收和紙片在貼之前保持足夠的干燥。制備完成后立即使用紙片,否則丟棄;不能保存。 (1)CAZ CAZ/棒酸,CTX CTX/棒酸。一種大于5MM,另一種小于5MM或相等,可確認為ESBL陽性。
    (2)加棒酸的藥片抑菌圈直徑反而小于不加的,可能是片間差異,應認為ESBL陰性

     

     



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