ESBLs是英文Extended-Spectrum β-lactamase的縮寫,中文意思是超廣譜β-內酰胺酶,它是當前抗生素出現的新的耐藥趨勢之一。
目前大腸埃希氏菌(大腸桿菌)、肺炎克雷伯氏菌是最常見的產ESBLs菌株的細菌,其次,陰溝腸桿菌、粘質沙雷氏菌、弗勞地枸櫞酸菌、銅綠假單孢菌也可出現產ESBLs菌株的細菌。
肺炎克雷伯菌、產酸克雷伯菌和大腸埃希菌中ESBLs檢測的篩選與確證試驗
方法 | 初步篩選試驗 | 表型確證試驗 |
培養基
| Mueller-Hinton瓊脂 | Mueller-Hinton瓊脂
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抗微生物藥 物紙片濃度 | 頭孢泊肟 10μg 或
頭孢他啶 30μg 或
氨曲南 30μg 或 頭孢噻肟 30μg 或
頭孢曲松 30μg (使用一種以上的藥物進行篩選將會提高檢測的敏感性) | 頭孢他啶 30μg 頭孢他啶/克拉維酸 30/10μg 和
頭孢噻肟 30μg
頭孢噻肟/克拉維酸 30/10μg
確證試驗需要同時使用頭孢噻肟和頭孢他啶,單獨和聯合克拉維酸的復合制劑) |
接種
| 按標準紙片擴散法的規定進行 | 按標準紙片擴散法的規定進行
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孵育條件 | ||
孵育時間 | ||
判讀結果
| 頭孢泊肟的抑菌圈≤17mm 頭孢他啶的抑菌圈≤22mm
氨曲南的抑菌圈 ≤27mm
頭孢噻肟的抑菌圈≤27mm
頭孢曲松的抑菌圈≤25mm 提示可能有ESBLs的產生 | 2個藥物中有任何一個,在加克拉維酸后,抑菌圈直徑與不加克拉維酸的抑菌圈相比,增大值≥5mm時,判定為產ESBLs(如,頭孢他啶的抑菌圈=16mm;頭孢他啶/克拉維酸的抑菌圈=21mm)
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質控建議 | 大腸埃希菌ATCC25922(見表3的質控范圍)
肺炎克雷伯菌ATCC700603: 頭孢泊肟抑菌圈9-16mm 頭孢他啶抑菌圈10-18mm 氨曲南抑菌圈 9-17mm
頭孢噻肟抑菌圈17-25mm
頭孢曲松抑菌圈16-24mm | 大腸埃希菌ATCC25922:所測試藥物聯合克拉維酸后的抑菌圈直徑與單藥抑菌圈相比,增大值≤2mm。
肺炎克雷伯菌ATCC700603: 頭孢他啶/克拉維酸抑菌圈直徑增大≥5mm; 頭孢噻肟/克拉維酸抑菌圈直徑增大≥3 mm。
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腳注
a. 頭孢他啶/克拉維酸(30/10μg)紙片與頭孢噻肟/克拉維酸(30/10μg)紙片的制備: 使用克拉維酸1000μg/ml的原液(新鮮制備或者從-70℃冰凍中取出已分裝在小瓶中的),把10μl的克拉維酸加到頭孢他啶(30μg)和頭孢噻肟(30μg)的紙片上。在紙片貼于平板之前1個小時內,用微量加樣器把10μl原液加到頭孢他啶和頭孢噻肟紙片上,允許有30分鐘的時間以利于克拉維酸的吸收和紙片在貼之前保持足夠的干燥。制備完成后立即使用紙片,否則丟棄;不能保存。 (1)CAZ CAZ/棒酸,CTX CTX/棒酸。一種大于5MM,另一種小于5MM或相等,可確認為ESBL陽性。
(2)加棒酸的藥片抑菌圈直徑反而小于不加的,可能是片間差異,應認為ESBL陰性