實驗概要
本實驗方法介紹了臍帶間充質干細胞原代分離的操作步驟。
主要試劑
所用試劑盒：
豬臍帶間充質干細胞分離和培養試劑盒 貨號：PUMS-000-001
人臍帶間充質干細胞分離和培養試劑盒 貨號：HUMS-000-001
規格：5次
產品名稱 | 貨號 | 規格 | 數量 |
（豬/人）臍帶間充質干細胞完全培養基 | 200ml/瓶 | 1瓶 | |
PBS | BM-001-500 | 500ml/瓶 | 1瓶 |
雙抗 | BS-003-100 | 100ml/瓶 | 1瓶 |
成纖維培養基 | 200ml/瓶 | 1瓶 | |
膠原酶I | EC-002-50 | 50ml/瓶 | 1瓶 |
DNA酶 | EC-003-50 | 50ml/瓶 | 1瓶 |
0.25%胰酶 | ET-002-100 | 100ml/瓶 | 1瓶 |
實驗步驟
1. 獲得臍帶組織。
2. 將臍帶組織用含有雙倍雙抗的PBS漂洗，把血塊洗凈。
3. 將臍帶組織剪成3-125px小段。
4. 橫向夾住臍帶組織，明顯可見2條臍動脈和1條臍靜脈。
5. 縱向剖開臍帶，露出血管，將血管從周圍組織分離出來。
6. 將臍帶組織漂洗干凈，用眼科剪將組織剪碎。
7. 加1mg/ml的膠原酶I，沒過組織塊即可，37℃搖床消化1h小時左右，看見基本沒大的組織塊。
8. 加成纖維細胞培養液終止，并加入DNAase，過40um細胞篩。
9. 離心，1500rpm，15min 。
10. 棄上清，根據獲得的細胞量接種細胞即可，一般一根臍帶可接種1個250px皿。
11. 4天左右可以傳代。
注意事項
1. 注意原材料的新鮮與保鮮。一般取來的材料都是當天來做，而且取材時最好是放在含有雙抗的PBS里，用冰盒運輸。
2. 取材時要保持嚴格的無菌操作。
3. 將組織漂洗干凈，不要殘留血塊和毛發。
4. 取材時要選用鋒利的手術器械，防止損傷組織。
5. 消化時間要掌握好，控制在大的組織塊剛剛完全消化完。
6. 要標記好細胞的品系，周齡，雌雄等信息。
7. 注意要用膠原酶I，而且消化時要加入DNA酶，防止粘稠。