實驗概要
大量的方法已經被設計用于篩選大規模的噬菌體肽庫。其中最簡單的形式就是使用直接吸附的方式將靶分子固定于一個固體支持物上，然后使其接觸到噬菌體庫。那些不能與之結合的噬菌體在一系列洗滌的過程中將會被除去，而可以結合的噬菌體克隆將在酸性洗脫后被重新獲得。
主要試劑
1. 磷酸鹽緩沖液
2. PBS/0.1％和1％BSA
3. 抗體封閉肽
4. 酸性洗脫液(0.1mol/L HCl，甘氨酸調節pH為2.2，0.1％BSA)
5. E.coli ARl 292從K91菌株衍生：HfrCavallithirecA：cat(Affymax Inc.)
6. LB培養基(1％蛋白胨，0.5％酵母提取物，0.5％NaCl)
主要設備
ELISA酶標板(Dynatech lmmulon-4)
實驗步驟
1. 親和篩選
1) 使用PBS稀釋捕捉抗體至濃度為100ug/ml，并將96孔酶標板其中12個孔中每孔各加入50ul上述溶液，于37℃孵育1小時。
2) 使用PBS洗板3次。用PBS/l％BSA注滿板孔，于37℃孵育1小時，以封閉板孔。
3) 用PBS洗板，并加入100ul可溶性受體，于室溫下孵育l小時或于4℃放置24小時。
4) 使用PBS洗板3次。于每孔中加入50ul 100umol/L抗體封閉肽溶液，于4℃孵育30分鐘。
5) 稀釋一份噬菌粒庫至PBS/1％BSA中，至終體積為1。2ml，并各加入100ul到經受體包被的孔中。于4℃振搖孵育2小時。
6) 用冷PBS洗板5次，后用PBS/1％BSA注滿板孔，于4℃孵育30分鐘。
7) 用冷PBS洗板5次，于每孔中加入酸性洗脫液100ul，于室溫下孵育10分鐘。轉移洗脫液到一個離心管中，用70ul 2mol/LTris堿液中和(pH未調節)。
2. 所篩選噬菌體的擴增
1) 挑取單克隆ARl 292菌株到5m1LB培養基中，37℃振搖培養過夜。
2) 加lml上述過夜培養物至20mlLB培養基中，振搖培養直至OD600值達到0.4。培養物于4℃6000r/min轉速(JA.20轉子)離心10分鐘，沉淀用2mlLB培養基重懸。
3) 加入lml噬菌體洗出液到lmlARl 292細胞中，于37℃靜置20分鐘。將噬菌體感染后的細胞加入到20mlSOPamp/glu培養基中，37℃振搖培養直至OD600值達到0.4。
4) 加入VCS-M13輔助噬菌體(約l0l0單位)到上述培養物中，于37℃靜置孵育20分鐘。再加入220ul 20％的阿拉伯糖溶液以及22ul 20mg/ml的卡那霉素溶液，于37℃振搖培養過夜。
5) 培養物于10000r/min離心15分鐘。轉移上清到一個新的離心管中，然后加入0.2倍體積的PEG/NaCl，充分混合后置于冰上1小時。
6) 于10000r/min離心15分鐘以沉淀噬菌體。除去上清后，噬菌體沉淀用lmlPBS/0.1％BSA重懸。