聚乙二醇(PEG)沉淀補體消耗試驗

實驗概要

本實驗用低濃度PEG將IC沉淀，沉淀物中加入補體，以溶血反應檢測了補體消耗率。

主要試劑

1. 熱聚合人ISC：制備方法同PEG沉淀試驗。
2. 硼酸緩沖鹽水(朋S) 含硼酸0.1mol/L，硼砂25mmol/L，NaCl 75mmol/L，調整為pH8.4
3. PEG 用BBS將PEG配成12.5%和2.5%。
4. 0.2mol/L EDTA-Na₂用1mol/L NaOH調整為pH7.2。
5. 5XVB保存液 NaCl 85.0g，巴比妥5.75g，巴比妥鈉3.75g，加蒸餾水約1500ml，加熱溶解后補加蒸餾水至2000mL。
6. GVB2加5×VB保存液400mL，0.03mol/LCaCl₂10mL，0.1mol/L MgCl₂ 10mL，2％明膠l00mL，補加蒸餾水至2000mL，pH7.5。
7. 致敏綿羊紅細胞(SRBC) 2％SRBC懸液加等量1：1 000溶血素，37℃水浴l0min，用GVB2加將致敏SRBC配成1.5×10⁸/mL。
8. 人補體與健康人對照血清選用總補體溶血活性正常的健康人血清數份混合，作為補體來源。自3名健康人各取血清50mL，各按lmLl份分裝，-70℃凍存，每次取3份血清作為對照。

實驗步驟

1. 待測血清0.3mL，加0.2mol/L EDTA-Na₂和BBS各50uL，充分混勻后加入12。5％PEG 0.1mL，混勻，置4℃ 90min。
2. 4℃ 1700r／min離心10min，棄上清，沉淀物用2.5％PEG洗1次，用玻璃棒攪拌，再于4℃ 1700r/min離心15min，棄上清，管口余水用濾紙吸除。
3. 加入37℃ 30min預溫的GV鏟’30uL，待沉淀溶解后，加入混合人補體10uL(用微量加樣器準確加入)。混勻，置37℃，使補體與IC充分反應。
4. 加入1.5X10⁸／mL致敏SRBCl.0mL，37℃水浴振蕩60min。取出后立即加人4℃冷生理鹽水6.5mL，離心，吸取上清液于414mn波長測吸光度。
5. 每批試驗以熱聚合人IgG 5、10、25、50、l00ug/mL制備標準曲線。