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  • 發布時間:2019-04-28 20:35 原文鏈接: FlowCytometricAnalysisofCellCycle

    Fixation

    1) Collect 2 X 106 cells.

    2) Pellet cells by spinning at 1,000 rpm, 4°C for 5 minutes.

    3) Resuspend cell pellet in 1 ml of cold PBS.

    4) Fix cells by adding 4 ml of -20°C absolute ethanol.

    5) Store cells at -20°C in this fixation buffer until ready for analysis. (No more than 2 weeks)


    Staining

    6) Centrifuge (as above) fixed cells and resuspend pellet in 1 ml of PBS.

    7) Add 100 μl of 200 μg/ml DNase-free, RNaseA and incubate at 37°C for 30 minutes.

    8) Add 100 μl of 1 mg/ml propidium iodide (light sensitive) and incubate at room temperature for 5-10 minutes.

    9) Place samples in 12 X 75 Falcon tubes and read on Becton Dickinson FACStarPLUS.

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