梅毒常見實驗室診斷方法及其進展(2)

TP抗原的人工合成

　　早在1989年，Issacs等[15]就提出了人工合成梅毒螺旋體抗原進行梅毒血清學診斷的設想。同年Ijesselmuiden等[16]就合成了TpN44.5(TmpA)用于酶聯免疫法檢測梅毒，他們檢驗了938供血者血標本，148例未經治療的梅毒患者，167例已經治療的梅毒患者，190例性病門診非梅毒患者，發現該方法特異性為99.6%,對一期梅毒的敏感性為76%、二期梅毒100%、早期潛伏梅毒98%。1995年Zrein等[17]合成了TpN15和TpN47用于酶免疫法檢測梅毒，他們對1822例標本進行檢測，發現該方法特異性達99.8%,敏感性接近100%。1996年Gerber等[18]對梅毒螺旋體抗原進行了較為全面的研究，他們用PCR法擴增了編碼梅毒螺旋體抗原的DNA，并插入大腸桿菌中使其表達，產生了TpN17、TpN29-35（TpD）、TpN44.5（TmpA）TpN47、TpN35以及TpN39梅毒螺旋體抗原，并應用酶聯免疫吸附試驗對合成的抗原進行檢測，結果發現TpN17、TpN47和TpN44.5的抗體滴度最高，而且這3種抗原聯合起來的敏感性要比單一任何一種抗原的敏感性要高，并且與萊姆病螺旋體無交叉反應。1997年Fujimura等[19]也合成了分子量為17kD、15kD、47kD、42kD的梅毒螺旋體抗原，并用M代表成熟抗原、S代表含有目的序列的抗原、G代表谷胱甘肽-S轉移酶融合抗原。他們發現M47、S42的表達水平較高，而M15、M17的表達水平很低，但G15、G17的表達水平很高，這使得用層析提純法能獲得大于95%的提純抗原，他們用ELISA法以1∶1000稀釋的血清檢測這些提純的抗原（G17、G15、M47、S42）發現G17抗原的敏感性最高。同年Centurion等[20]對梅毒15kD抗原的研究發現，TpN15的保守性很強，在梅毒螺旋體各株中，如Nichol株、Bal-3株、Gauthier株、Bosnia株以及Cuniculi a、H、K株，編碼15kD抗原的DNA序列沒有明顯變異，并且各株梅毒螺旋體增色表達該抗原，這說明15kD抗原的變異很少。綜合以上對梅毒螺旋體抗原的研究，發現TpN15、TpN17、TpN44.5、TpN47的抗原性最強，并且綜合抗原的敏感性和特異性比單一抗原更優越。

　　1998年Young合成了TpN15、TpN17和TpN47，并設計了快速診斷試劑盒Syphilis fast[13]和自動化程度很高的ICE Syphilis[12]試劑盒。Syphilis fast是將3種合成抗原包被在乳膠顆粒上，當與含有梅毒抗體的血清混合后，可在3分鐘內產生肉眼可見的凝集，如果血清中沒有抗體，乳膠顆粒將保持均質狀。如果血清產生凝集則需要做重復試驗，重復試驗中血清首先與含有合成抗原（與包被抗原一樣）的試劑預孵育1分鐘，然后加入抗原包被的乳膠顆粒，混合后靜置3分鐘，如果沒有凝集則說明血清中有梅毒抗體存在，而凝集現象被預孵育中的合成抗原抑制了；如果產生凝集則說明血清中沒有梅毒抗體，第一次試驗中的凝集現象不是由梅毒抗體產生的。這種試驗簡單、快速并且敏感性、特異性均很高，用Syphilis fast、Select Syph-G、VDRL、TPHA和FTA-ABS，以平行配對法檢測1617例血清標本，結果發現Syphilis fast的特異性達99.9%，與Select Syph-G的特異性99.5%和VDRL的特異性99.4%相比有統計學差異（P＜0.02），而Syphilis fast 95.6%的敏感性與TPHA和FTA-ABS相比統計學差異。Syphilis Fast和Select syph-G對未治療的梅毒感染的敏感性均很高為96.8%，VDRL對未治療的早期梅毒感染的敏感性也達92.3%，但對未治療的晚期梅毒感染的敏感性僅為30.8%，而Syphilis fast和Selcet Syph-G對檢測已治療的梅毒，包括晚期梅毒的敏感性也高達95.7%。所以該方法可替代RPR、VDRL進行梅毒的初篩，并能克服心磷脂試驗中的前帶現象。

　　ICE Syphilis是基于EIA原理設計的試驗，由于EIA試驗自動化程度高、結果客觀、能夠減少主觀操作失誤，所以適用于大量標本的篩查。ICE syphilis的原理是用合成的3種梅毒抗原包被于微孔板上，同時包被在微孔板中的還有抗人IgG、IgM抗體，并用過氧化物酶標記的合成抗原（TpN15、TpN17、TpN47）檢測被捕捉的抗梅毒螺旋體抗體。該方法總的敏感性拉近100%，而Select syph-G的敏感性為92.4%、TPHA 97.1%、FTA-ASB 92.4%、VDRL僅為37.5%，此外由于梅毒合并HIV感染的出現，可以使血清中的梅毒抗體水平很低，而ICE syphilis的抗體指數（血清吸光值/cut off值）比Select Syph-G的高（P＜0.001），這意味著ICE syphilis更敏感，所以雖然原理一樣，但ICE Syphilis用合成抗原要比Select syph-G用天然抗原更具優越性，而且99.8%的特異性、對已治療患者和晚期梅毒患者的高度敏感性，使該方法適用于各種醫療機構。

　　目前梅毒檢測方法的發展突飛猛進，有針對基層醫療單位的快速、簡便的試劑盒，也有針對專門醫療機構，如血站、性病防治機構等每天需要檢測大量標本的自動化程度很高的試劑盒。而國外進口的試劑價格昂貴，為了適應中國國情，必須加強試劑的國產化，以期降低成本。這方面有許多工作要做，而低成本合成梅毒螺旋體抗原是關鍵。

參考文獻

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