【摘要】 通過從靈敏度、特異性、準確性及穩定性等四個方面對金標乙肝表面抗原檢測法進行方法學探討，并分別用金標法及酶免疫法對1200例體檢及臨床標本進行檢測，發現金標法檢測血清中乙肝表面抗原特異性強，靈敏度高，與酶免疫法符合率為99.0%，且無需特殊儀器設備，簡便快速，具有廣泛應用價值。
【關鍵詞】 金標法；乙肝表面抗原
乙肝表面抗原（HBsAg）是乙型肝炎病毒外殼蛋白中的主要成分陽性是感染乙肝病毒的標志，是檢查乙肝血清標志物中較重要的一項［1］。近年來發展的金標法檢測HBsAg，與傳統的酶免疫法（EIA）相比，具有簡便、快速、準確，不需要儀器設備等優點，能滿足臨床急診快速出結果的需要，且較適合使用于流行病學調查，應用前景非常寬廣。
1 材料與方法
1.1 材料 （1）金標試紙條：上海洪泰生物技術發展有限公司產品。（2）HBsAg靈敏度標準參比品：中國藥品生物制品檢定所產品。（3）HBsAg酶免疫診斷試劑盒，HBsAg、HBcAg、HBeAg陽性對照血清：中外合資上海實業科華生物技術有限公司產品。（4）血清標本：1200份體檢及臨床血清標本，其中乙型肝炎患者血清172份，健康人血清1028份。
1.2 方法 （1）5ng/ml標準參比品 用生理鹽水分別稀釋成4ng/ml,3ng/ml,2ng/ml,1ng/ml幾種濃度，各取0.1～0.2ml置于潔凈試管中，用金標法試紙條進行檢測，嚴格按照說明書所述，將測試條有金標抗體端插入血清內，放置一定時間后觀察結果。（2）HBsAg、HBcAg、HBeAg陽性對照血清各取3份，每份為0.1～0.2ml加入已備好潔凈試管中，用金標法對各份血清進行檢測。（3）分別用金標法、EIA法對1200份體檢及臨床血清標本進行檢測。（4）將金標試紙條各10條分置于37℃、室溫（25℃）保存5天，做熱穩定試驗。
2 結果
（1）用金標法對5種濃度的HBsAg陽性標準參比品進行檢測。結果確定時間：強陽性參比品（4～5ng/ml）在2min內即可在檢測線見到紅色膠體金顆粒聚集；陽性參比品（3mg/ml）在5min內即可出現兩條紫紅色線條，弱陽性標本（1～2ng/ml）約需20min確定結果。說明了金標法敏感性較強，靈敏度可達1ng/ml，可以滿足臨床要求。（2）將金標試紙條分別插入HBsAg、HBcAg、HBeAg陽性對照血清各3份中，結果只有HBsAg陽性對照血清管中試紙條出現兩條紅色線，說明該試紙條只與HBsAg有特異性反應，特異性強，不易出現假陽性。（3）分別用金標法、EIA法對1200份體檢及臨床血清標本進行檢測，所得結果顯示：金標法與EIA法所做結果有162例陽性結果一致，有1026例陰性結果一致，有12份血清兩法檢測結果不符，比較兩法檢測HBsAg的一致性，符合率為99.0%。12份兩法結果不符的血清中，有5例（乙肝組3份，健康組2份）金標法呈弱陽性，而EIA陰性，但這5份血清EIA吸光度值均接近臨界值。另7例（均為乙肝組血清）金標法陰性，EIA為HBsAg弱陽性。通過計算，可得出金標法臨床靈敏度為95.9%，臨床特異性為99.8%，臨床準確度為99.2%，陽性預測率為98.8%。（4）將金標法試紙于37℃、25℃各10條放置5天后，測定10份不同血清標本（乙肝組與健康組各5例），所得結果與放置4℃的試紙檢測結果無明顯差別。說明金標法試紙條性質較穩定，易保存。
3 討論
HBsAg的檢測可作為乙型肝炎病毒感染的一個重要指標，目前多采用EIA或EIA一步法，由于其試劑盒中酶標試劑不易保存，操作中需通過加樣、加試劑、孵育、洗板等一系列過程，延時長，且易引起標本間交叉污染或陽性標本對人體的污染，給實驗室檢測工作帶來一些不便，不能滿足臨床急診快速出結果的要求。
近年來，隨著現代免疫化學技術的發展，出現了膠體金免疫層析法［2］。該法是將羊抗HBs、羊抗鼠IgG分別固定在特制的纖維素試帶上并呈兩條線上下排列，羊抗鼠IgG線在試帶條上方為陰性對照，抗HBs在下方為測定。試帶條中含均勻分布的膠體金-抗HBs和無關的金標記鼠IgG。檢測時血清沿試帶上行，其中HBsAg在上行過程中與膠體金-抗HBs結合，待行至羊抗HBs線時，形成金標記抗HBs-HBsAg-抗HBs復合物而在試帶上顯紅色線，試帶上無關的金標鼠IgG隨血清繼續上行至羊抗鼠IgG處時形成紅色金標復合物為陰性對照。判斷結果時，出現兩條紅色線時為陽性，只在對照線出現紅色線時為陰性，如對照線未出現紅色，則表明該試紙條失效。該法集免疫反應與免疫層析的特點，靈敏度高，特異性強，且試紙條輕便易帶易保存、易操作，無需儀器設備，病人標本可隨來隨查，20min內即可發出結果，適合于大批健康體檢、流行病學調查及門診急診標本的應用。
當然，該法與EIA相比，只能作定性檢查，靈敏度稍差，易將少數弱陽性標本忽視，出現假陰性，具體原因及改善辦法，有待進一步探討。
【參考文獻】
1 周繼文.膠體金免疫層析法檢測乙型肝炎病毒表面抗原.中華醫學檢驗雜志,1998，21：30-32.
2 李成文.現代免疫化學技術.上海：上海科學技術出版社，1992，165-181.