干化學又稱為固相化學, 是將一項測定中所需的全部或部份試劑預固定在載體中, 根據Kubelka - Munk 理論, 其反射率(R) 和固相層的厚度(X) , 單位厚度的光吸收系數(K) 及固相反應層的散射系數(S) 有關, 當K和S 固定時, R 僅同K有關, 而K的大小同待測物的濃度成正比,用反射光度計檢測R 的大小, 可計算出待測物的濃度[1 ] 。
因急診生化檢驗工作量大, 我院檢驗科添置了瑞士Roche公司產Reflotron òsprint 全血干式生化分析儀, 這是一種適用干大中型現代化醫院急診實驗室的診斷儀器, 能即時測定17 種臨床測試項目(AKP、AMY, BIL、CH、CK、CREA、GGT、GIU、GOT、GPT、HDL-C、HGB、K+ 、P-AMY, TG、UREA、UA) , 有三個獨立的檢測單位能同時工作, 2～3 分鐘內可得到3 個不同的檢測結果, 操作簡易, 樣本可以是全血、血漿或血清, 無需預熱試劑, 3 個簡單步驟即可得出結果, 無需定標, 試紙條有效期長、易保存(部分可室溫保存) 。因其體積小, 占用空間不大, 適用于臨床實驗診斷中心(檢驗科) 急診化驗室生化項目的檢測。
為了保證檢驗結果的可靠性, 我們用Reflotron òsprint全血干式生化分析儀和TOSHIBA 40FR 全自動生化分析儀對急診生化檢驗中最常用的檢測項目Glu、Cr、Urea、a-Amy進行檢測, 對檢測結果的相關性、重復性、精密度進行對比分析, 結果如下。
材料與方法
1 儀器和試劑 (1) 瑞士Roche 公司Reflotron òsprint 全血干式生化分析儀及其干化學法血糖(Glu) 、肌酐(Cr) 、尿素(Urea) 、a2淀粉酶(a-Amy) 測定試紙條; (2) 日本東芝公司產TOSHIBA 40FR 全自動生化分析儀。Glu 和Urea 測定采用上海復星長征產液體試劑盒, Cr 和a2Amy 測定采用溫州東甌生物工程有限公司所產液體試劑盒。Glu 以試劑盒自帶標準液定標校準; Cr、a2Amy 以英國RANDOX CalibrationCAL 2350 (Lot 235UN/ 1) 、Urea 用CAL 2351 (Lot 160UE) 定標校準。
2 標本來源 門診及住院病人100 例, 其中男性52 例, 女性48 例; 年齡35～75 歲, 平均(5316 ±211) 歲。標本為檢驗科門診空腹抽血標本及病房送檢生化檢驗標本, 待血液凝固后分離血清分別進行GLU、Cr、Urea、a-Amy 的干化學試紙法和全自動生化分析儀酶法檢測。用BECKMAN 未定值人血基質質控血清Level 1 (批號: M204241) 、Level 3 (批號: M204243) 分別在二臺儀器上各進行10 批次檢測。
3 檢測方法 (1) 干化學法: 直接加定量血清32ul 干試紙條上, 待完全滲透后即在Reflotron òsprint 全血干式生化分析儀進行檢測。(2) 酶法: 血糖采用葡萄糖氧化酶法(GOD2POD) 、尿素采用尿素酶( 尿素酶—谷氨酸脫氫酶GLDH) 法、肌酐采用肌氨酸氧化酶法、a2淀粉酶采用對硝基苯麥芽庚糖苷( 4NP2G7 ) 法[2 ] 檢測。用RANDOXCalibration CAL2350 (Lot : 235UN/ l) 、CAL2351 (Lot : 160UE)標準液和血糖標準液定標校準后, 進行檢測, 分析上述4個項目在2 臺儀器上檢測結果有無顯著性差異。(3) 批內精密度試驗: 用BECKMAN 未定值人血基質質控血清level 1(批號: M204241) 、level 3 (批號: M204243) 分別在2 臺儀器上進行10 批次檢測, 計算批內精密度(CV %值) 。
4 統計方法 配對t 檢驗和直線回歸與相關分析, 統計軟件采用SPSS 1110。結 果
1 對比實驗 在Roche Reflotron òsprint 干式生化分析儀和TOSHIBA 40FR 生化分析儀上同時對100 例急診生化標本進行Clu、Cr、Urea、a2Amy 檢測分析, 檢測結果分析, 4 個項目各項檢測結果在2 臺儀器上相關系數r 分別為01982、
01991、01987、01992 , 均> 01975 , 且差異無顯著性( P >0105) 。
2 精密度實驗 用RANDOX level 1 和level 3 校準血清各10份分別做批內精密度試驗, 實驗結果見表1。Roche eflotron
òsprint 干式生化分析儀和TOSHIBA 40FR 生化分析儀各項目檢測結果的精密度CV 值在0185 %～4192 %間, 精密度良好, 重復性也較好。
討 論
100 例病人生化標本用干生化試紙法和全自動生化分析儀酶法檢測Glu、Cr、Urea、a-Amy , 各項目的相關系數r 均> 01975 ; 兩種方法對各項目檢測值的配對t 檢驗P > 0105 ,表明Roche Reflotronòsprint 干式生化分析儀和TOSHIBA 40FR生化分析儀檢測結果有很高的相關性, 檢測結果無顯著性差異, 顯示Reflotron òsprint 干式生化分析儀(干生化試紙
法) 在敏感性、特異性方面均符合要求。
用BECKMAN 未定值人血基質質控血清level 1 ( lot :M204241) level 3 ( lot : M204243) 對Glu、Cr、Urea、a2Amy在Roche Reflotronòsprint 全血干式生化分析儀(干化學試紙法) 和TOSHIBA 40FR 生化分析儀(酶法) 上各進行10 批次的測定結果分析表明, 各儀器各項目檢測結果穩定, 精密度(CV 值) 1156 %～4156 %之間, 儀器的穩定性、重復性良好。而且我們在測定分析中發現, 大部分項目測定Reflotron òsprint 全血干式生化分析儀在批內精密度、重復性方面比TOSHIBA 40FR 生化分析儀上要好。
1985 年開發的干化學多層膜試紙, 使其定量分析水平達到或接近常規濕化學法的水平[3 ] 。多層膜試紙其獨特的優點是采用多層膜技術, 不僅能掩蓋待測物的有色物質并提供背景, 選擇性地阻留或去除的干擾物質, 而且還將等同于濕化學反應原理的各種物理、化學反應在各分層中進行, 使某一層中的產物可進入另一層中進行反應, 從而引導反應序列, 其各層可以給出特定的環境用以控制反應序列和反應時間[4 ] 。隨著多學科高新技術發展帶動干化學技術的成熟, 試劑載體品種增多, 質量提高, 特別是信號檢測系統—反射光度計技術的日益完善, 使干化學分析技術不但簡便快捷, 且準確可靠[5 ] 。此次檢測分析表明, 干化學試紙法可為臨床提供快速、準確的實驗診斷參考依據。
適用于臨床實驗診斷中心(檢驗科) 急診化驗室急診生化項目的檢測。