細菌對于碳水化合物的代謝試驗

　　1.糖（醇、苷）類發酵試驗
　
　　（1）原理：由于各種細菌含有發酵不同糖（醇、苷）類的酶，故分解糖類的能力各不相同，有的能分解多種糖類，有的僅能分解1～2種糖類，還有的不能分解。細菌分解糖類后的終末產物亦不一致，有的產酸、產氣，有的僅產酸，故可利用此特點以鑒別細菌。
　　（2）培養基：在培養基中加入0.5%～1%的糖類（單糖、雙糖或多糖）、醇類（甘露醇、肌醇等）、苷類（水楊苷等）。培養基可為液體、半固體、固體或微量生化管幾種類型。
　　（3）方法：將分離的純種細菌，以無菌操作接種到糖（醇、苷）類發酵培養基中，置培養箱中培養數小時至兩周后，觀察結果。若用微量發酵管，或要求培養時間較長時，應保持濕度，以免培養基干燥。
　　（4）結果：接種的細菌，若能分解培養基中的糖（醇、苷）類產酸時，培養基中的指示劑呈酸性反應。若產氣可使液體培養基中倒管內或半固體培養基內出現氣泡，固體培養基內有裂隙等現象。若不分解，培養基中除有細菌生長外，無任何其他變化。
　　（5）應用：是鑒定細菌最主要和最基本的試驗，特別對腸桿菌科細菌的鑒定尤為重要。
　
　　2.氧化-發酵試驗（O/F試驗）
　
　　（1）原理：細菌在分解葡萄糖的過程中，必須有分子氧參加的，稱為氧化型。氧化型細菌在無氧環境中不能分解葡萄糖。細菌在分解葡萄糖的過程中，可以進行無氧降解的，稱為發酵型。發酵型細菌無論在有氧或無氧的環境中都能分解葡萄糖。不分解葡萄糖的細菌稱為產堿型。利用此試驗可區分細菌的代謝類型。
　　（2）培養基：Hugh-Leifson培養基 　　（3）方法：將待檢菌同時穿刺接種兩支HL培養基，其中一支培養基滴加無菌的液體石蠟（或其他礦物油），高度不少于1cm.將培養基于35℃培養48h或更長。
　　（4）結果：兩支培養基均無變化為產堿型或不分解糖型；兩支培養基均產酸為發酵型；若僅不加石蠟的培養基產酸為氧化型。
　　（5）應用：主要用于腸桿菌科細菌與非發酵菌的鑒別，前者均為發酵型，而后者通常為氧化型或產堿型。也可用于葡萄球菌與微球菌間的鑒別。
　
　　3.β-半乳糖苷酶試驗（ONPG試驗）
　
　　（1）原理：有的細菌可產生β-半乳糖苷酶，能分解鄰-硝基酚-β-D-半乳糖苷（ONPG），而生成黃色的鄰-硝基酚，在很低濃度下也可檢出。
　　（2）試劑：0.75M ONPG溶液：取80mg溶于15ml蒸餾水中，在加入緩沖液（6.9g NaH2P04溶于45ml蒸餾水中，用30% NaOH調整pH為7.0，再加水至50ml）5ml，置4℃冰箱中保存。0NPG溶液為無色，如出現黃色，則不應再用。
　　（3）方法：從克氏雙糖鐵培養基上取菌，于0.25ml無菌生理鹽水中制成菌懸液，加入一滴甲苯并充分振搖，使酶釋放。將試管置37℃水浴5min，加入0.25ml ONPG試劑，水浴20min～3h觀察結果。
　　（4）結果：菌懸液呈現黃色為陽性反應，一般在20～30min內顯色。
　　（5）應用：迅速及遲緩分解乳糖的細菌ONPG試驗為陽性，而不發酵乳糖的細菌為陰性。本實驗主要用于遲緩發酵乳糖菌株的快速鑒定。
　
　　4.七葉苷水解試驗
　
　　（1）原理：有的細菌可將七葉苷分解成葡萄糖和七葉素，七葉素與培養基中枸櫞酸鐵的二價鐵離于反應，生成黑色的化合物，使培養基呈黑色。
　　（2）培養基：七葉苷培養基、膽汁七葉苷培養基。
　　（3）方法：將待檢菌接種于七葉苷培養基中，培養后觀察結果。
　　（4）結果：培養基變為黑色為陽性，不變色者為陰性醫學教|育網搜集整理。
　　（5）應用：主要用于D群鏈球菌與其他鏈球菌的鑒別，前者陽性，后者陰性。也可用于革蘭陰性桿菌及厭氧菌的鑒別。
　
　　5.甲基紅試驗
　
　　（1）原理：某些細菌在糖代謝過程中，分解葡萄糖產生丙酮酸，丙酮酸可進一步分解，產生甲酸、乙酸、乳酸等，使培養基的pH降至4.5以下，當加入甲基紅試劑則呈紅色，為甲基紅試驗陽性。若細菌分解葡萄糖產酸量少，或產生的酸進一步轉化為其他物質（如醇、酮、醚、氣體和水等），則培養基的酸度仍在pH6.2以上，故加入甲基紅指示劑呈黃色，是為陰性。
　　（2）培養基：葡萄糖蛋白胨水培養基。
　　（3）方法：將待檢菌接種于上述培養基中，培養2～4d，于培養基內加入甲基紅試劑，立即觀察結果。
　　（4）結果：呈現紅色為陽性；橘紅色為弱陽性；黃色為陰性。
　　（5）應用：主要用于鑒別大腸埃希菌與產氣腸桿菌，前者為陽性，后者為陰性。此外腸桿菌科中沙門菌屬、志賀菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬等為陽性，而腸桿菌屬、哈夫尼亞菌屬則為陰性 。
　
　　6.V-P試驗
　
　　（1）原理：某些細菌在糖代謝過程中，分解葡萄糖產生丙酮酸，丙酮酸脫羧產生乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在堿性環境中，被空氣中的氧氧化為二乙酰，進而與培養基內蛋白胨中精氨酸所含的胍基起作用，生成紅色化合物，則為V-P試驗陽性。若培養基中胍基含量較少，則可加入少量含胍基化合物，如肌酸或肌酐等。試驗時加入a-萘酚可加速此反應。
　　（2）培養基：葡萄糖蛋白胨水培養基醫學教|育網搜集整理。
　　（3）方法：將待檢菌接種于上述培養基中，于35℃培養48h后加入甲液（6% α-萘酚酒精溶液）和乙液（40% KOH溶液），振搖。
　　（4）結果：在數分鐘內出現紅色為陽性；如無紅色出現且于35℃4h后仍如故者即為陰性。
　　（5）應用：本試驗常與甲基紅試驗一起使用，因為前者陽性的細菌，后者通常為陰性