腫瘤標志物檢測的影響因素和應用原則(2)

二、腫瘤標志物檢測的影響因素和質量控制

㈠ 分析前

1. 標本的采集 血液標本的正確采集和保存是腫瘤標志物測定結果準確的重要保證。如前列腺按摩、前列腺穿刺、射精、導尿和直腸鏡檢查后，血液 PSA 和 PAP 值可升高；肝、腎功能異常和膽道排泄不暢、膽汁淤滯等均可造成腫瘤標志物如 CEA 、 ALP 、 GGT 、 細胞因子 等濃度增高；某些藥物會影響腫瘤標志物的濃度，如抗雄激素治療前列腺癌時可抑制 PSA 產生，導致PSA 假陰性結果；唾液和汗液污染標本可使SCC 升高。

　　由于紅細胞和血小板中也存在神經元特異性烯醇化酶（ NSE ），因此，樣本溶血可使血液中NSE 濃度增高。 試管內的促凝劑，對某些項目的測定有干擾。

2. 標本的保存 血液標本采集后應及時離心，保存于4 ℃ 冰箱中， 24 小時內測定；如在短期內測定，則應 -20 ℃ 保存，長期保存應置 -70 ℃ 冰箱 , 標本應防止反復凍融。酶類和激素類腫瘤標志物不穩定，易降解，應及時測定或低溫保存。

㈡ 分析中

1. 測定方法和試劑對檢測結果的影響： 從方法學來看，腫瘤標志物測定方法很多，有放射免疫測定法，酶聯免疫測定法，化學發光免疫測定法等，每種測定方法有自己的精密度和重復性，但手工操作的方法重復性較差，誤差比較大，操作時要特別認真；用自動化儀器進行測定，重復性好，誤差小。

　　不同的試劑盒測定也有差異 , 其原因可能是由于使用的單克隆抗體針對抗原的位點不同所致。有時即使使用同一抗體，也可能因抗原異質性（如原發腫瘤轉移后，失去了原有的抗原性而停止分泌原有的腫瘤抗原）或基質的影響而得到不同的結果。有研究報道，使用 12 種不同的 CEA 試劑盒檢測某一混合血清中 CEA 的濃度，結果其差異超過 100% 。導致分析間誤差的主要原因是沒有測定的標準化，包括缺乏統一的抗原、抗原成分、校正品和參考方法等。因此，在工作中要盡量使用同一種方法，同一種儀器和同一廠家的試劑盒進行測定。

2. “鉤狀效應”對檢測結果的影響： 腫瘤標志物的范圍常涵蓋幾個數量級，“鉤狀效應”可將高濃度結果錯誤報告為低濃度。 酶聯免疫測定或免疫放射測定時，若待測樣本中抗原濃度過高，會出現高濃度后帶現象，即“鉤狀效應”（ hook effect ），此時免疫反應被明顯抑制，出現錯誤的低值，要消除這種干擾，只有對樣本進行適當稀釋后重新測定。

3. 交叉污染對檢測結果的影響：當測定很高濃度的標本時，交叉污染成為一個導致假陽性的潛在問題，所以應不時地復查有無標本被交叉污染。

4. 嗜異性抗體對檢測結果的影響： 大多數腫瘤標志物的測定中常使用 一對鼠 單克隆抗體來與腫瘤抗原反應，如果病人血清中存在嗜異性抗體（特別是人抗鼠抗體） ，它可能在兩種鼠單克隆抗體間起“橋梁”作用，導致在無抗原的情況下，出現腫瘤標志物濃度增高的假象。避免的辦法是在樣本中先加入提純的鼠 IgG ，經溫育后，再用PEG 沉淀鼠IgG 和人抗鼠 IgG 復合物，然后再進行測定。嗜異性抗體可出現在曾被鼠或寵物咬過的人，以及使用過動物免疫劑（如單克隆抗體）治療過的人。

5 腫瘤標志物檢測的質量控制

⑴ 檢測結果的重復性要求： 常規腫瘤標志物測定的變異系數， 批內 CV<5% ， 批間 CV<10% ( 期望值 ) 。

⑵ 室內質控標本的要求： 室內質控應包括陰性和陽性低值和高值質控血清，要能涵蓋腫瘤標志物測定的范圍 。

⑶ 室內質控品要求： 以血清為基質。

⑷ 室內質控圖： 腫瘤標志物很少有參考方法 ，要堅持作室內質控圖，以均值為靶值，來判斷試驗的穩定性和重復性。

㈢ 分析后：

1 ．參考值范圍，不同標本如血液、尿液、胸、腹水等，必須有不同的參考值。不同地區、不同人群、不同方法、不同試劑和設備應建立自己的參考值范圍。

2 ．病人基礎測定值的變化，對于結果的分析極有價值。故應監測病人治療前、治療中和治療后各個階段 腫瘤標志物含量的變化，最好畫一張腫瘤標志物含量 的變化的曲線圖，以便綜合分析。

3 ．上升或下降25 ％的臨床意義 ，一般病人的結果在排除檢測方法引起的誤差后，上升或下降 25 ％都有臨床價值。對于測定結果升高的標本必須復查，以防測定誤差。

4 ．加強與臨床的交流和溝通，由于腫瘤標志物測定其臨床意義的特殊性，必須 加強與臨床的交流和溝通，當改變腫瘤標志物檢測方法和試劑時，必須通知臨床，否則會影響結果的判斷。 建議醫師開化驗單時提供簡短的病人信息，如“手術后 ”“化療 3 次后 ” 等，這對解釋結果非常重要，還可幫助我們發現實驗室的偶然差錯。

5 ．必須知道腫瘤標志物的半壽期 ，這有助解釋某些腫瘤標志物，如AFP 和hCG 的濃度變化， 對于臨床判斷療效有重要意義。