酶切、回收、連接常識（6）

二．多選題

1．重組連接時，反應體系必須的組分有（ A、C）

A．Mg²⁺   B. BSA   C. ATP   D. PO₄^3-  E . EDTA

2．DNA片段重組連接可用下列哪些方法（A、B、C、D、E）

A．平末端連接    B. 粘末端連接  C. 加接頭連接    D.  同聚尾連接

E . T載體連接

3．酚抽提法回收DNA片段后殘余的哪些物質可能會影響連接反應（A、C）

A．酚  B.微量的EB  C.瓊脂糖   D. 少量的乙酸鈉   E .少量的乙醇

4．產生平末端的方法主要有（A、B、E）

A．用產生平末端的限制酶切 。

B．用klenow片段補齊5‘粘末端。

C．用末端轉移酶補齊粘末端。

D．用Taq聚合酶補齊粘末端。

E．用S1核酸酶降解粘末端。

5．在DNA重組連接時，常采用連接頭連接（linker ligation），其作用是（A、B、C、E）

A．引入某些限制酶切位點。        B.  人工構建載體。

C．增加調控元件。                D.  調整閱讀框。

E．通過接頭引入與目的基因相同的限制酶位點，并對目的基因相應酶切點進行甲基化修飾保護，可保護目的基因不受限制酶破壞。

6．構建載體時，使用雙酶切相對于單酶切的優點在于（A、B、C、D）

A．避免載體自身環化   B.  提高連接效率   C.  控制外源基因的插入方向

D.  便于轉化后的篩選     E . 便于修改閱讀框

7．下列關于同聚物加尾法的說法正確的是（A、B、C、D、E）

A．其核心是利用末端轉移酶的功能，將載體和外源DNA的3‘端再加上一端寡核苷酸。

B．不易自身環化。  C. 連接效率高       D.  適用于CDNA克隆

E．可能會產生某種限制酶切位點。

8．下列與DNA重組連接相關的說法正確的是 （A、D、E）

A．不匹配的粘末端可通過部分填補后連接。

B． 同聚尾法連接不僅連接效率高，也易回收插入的片段。

C．限制酶切割DNA后加入EDTA-SDS終止液抑制限制酶活性，將有利于重組連接。

D．Mg²⁺-ATP是T₄DNA連接酶反應時的必須因素。

E．平末端連接時，在反應體系中加入適量凝聚劑可提高連接效率。

9．下列哪些因素對保證較高連接效率是有利的（A、C、D）

A．高純度DNA。

B．載體與目的基因摩爾數之比為1：1。

C．載體與目的基因摩爾數之比為1：3~5。