DGGE，CGGE及TGGE比較

DGGE，CGGE及TGGE三種方法是基于相同的原理而設計的突變檢測方法，它仍均是根據DNA的解鏈特性而設計.對于同一定序列組成或的DNA片段來說，它具有恒定的解鏈溫度(Tm)，但若其序列發生改變時，Tm值亦發生改變，在含有變性因素(變性劑， 高溫)的凝膠半進行電泳，當其比鏈解開形成分叉時，電泳遷移的速度就會改變.Tm值 全要取決于DNA的堿基組成，序列中出現單堿基替換時，Tm亦發生改變，電泳遷移率 亦改變，此即DGGE，CDGE及TGGE鑒定突變的技術基礎.

　　1.變性梯度凝膠電泳(denaturing gel gradient electrophoresis，DGGE)

　　DGGE是檢測基因突變故為精確的方法，它不僅可檢測單一片段的單點突變，對多 點突變的檢測亦較容易，該方法與PCR技術相結合，使其能非常快速的對大量標本進 行分析.

　　對于一DNA片段來說，其Tm值與基堿基組或有關，當其堿基組成發生變化時，Tm 值亦改變，因此，對于突變的片段來說，若其在一變性物質線性梯度增加的凝膠上進 行電泳時，隨著變性劑濃度的增加，當這種濃度達一定值時突變的DNA片段發生解鏈 而形成分叉，其電泳遷移速度變慢.因此突變的DNA片段與正常的DNA片段電泳的遷移 位置有差別，研究證明DGGE可檢出任何糞型的單堿基取代，如果將突變型與正常的 DNA片段形成異源雙鏈時，其敏感性大大提高.

　　2.恒定變性膠電泳(Constant deratarared gel electrophoresis CDGE)

　　CDGE是DGGE基礎上發展起來的基因突變檢測技術，亦是利用突變基因與正常基因 片段間Tm值的差異來檢測突變的方法，該方法與DGGE的區別在于聚丙烯酰胺中的含的 變性劑濃度相當于含突變基因片段的Tm值，而且濃度恒定，而不是線性遞增.為了提 高DGGE和CDGE的檢測敏感性，通常在一側引物的5'端設計一含GC的區域(GC-ClampGC 鉗)，避免了DNA的完全解鏈，從而提高了突變的檢出率，可達100%.

　　3.溫度梯度凝膠電泳(Temperature gradient gel electrophoresis TGGE)

　　該方法是將PCR擴增的產物量一中性聚丙烯酰胺凝膠上，在一溫度線性梯度上升 的電場中進行電泳，當DNA雙鏈到達其Tm時，雙鏈解開，形成分叉，而影響電泳遷移 率，突變的擴增產物其Tm值與野先型有明顯不同，因而有不同的解鏈區，從而造成電 泳遷移效率的差別，據此可判斷檢材中DNA有無突變.

由于DGGE及TGGE能區分不同DNA的堿基構成， 所以也越來越多地運用到分析環境中微生物的群落結構。