王向東
江蘇南通良春中醫醫院
隨著網絡及媒體的發展，強直性脊柱炎（AS）也越來越多地出現在我們的視野中。從一些著名的演藝明星，到一些普通的患者，都在經歷著病痛的折磨。HLA-B27（人類白細胞抗原B27），是強直性脊柱炎（AS）實驗室檢查的重要指標，在強直性脊柱炎患者中陽性率高達90%。今天，我們從檢驗醫學的角度談一下，HLA-B27檢測的方法學區別以及其臨床意義。
HLA-B27基因屬于Ⅰ型MHC基因，表達在機體中所有有核的細胞上，尤其是淋巴細胞的表面有豐富的含量。我們根據HLA的特點，可以進行血清學、細胞學和分子生物學的分型。根據它的表達特點，用于臨床上的檢測HLA-B27的常見方法包括微量淋巴細胞毒法（complement dependent cytotoxity , CDC）、雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）、磁珠酶聯免疫分析法（IMS-ELISA）、流式細胞儀分析法（FCM）、聚合酶鏈反應-序列特異性引物法（PCR-SSP）以及實時熒光PCR（RT-PCR）法等，下面我們慢慢分析：
01微量淋巴細胞毒試驗(CDC )
應用已知抗HLA的特異性標準分型血清與待測淋巴細胞混合，在補體的參與下可以使攜帶與分型血清型相同抗原的淋巴細胞死亡，判定被檢者HLA型別的一種方法。
優點：不需要特殊的儀器，易于操作，一般實驗室都可開展。
缺點：影響因素比較多，如細胞純度、補體的活性和差異、抗體的純度和效價、HLA的高度多態性、細胞表面B27抗原分子表達數目及抗原交叉性、操作者的主觀影響等，容易造成假陽性和假陰性的結果。
02酶聯免疫吸附試驗（ELISA）
應用純化的B27抗體包被微孔板，依次加入HLA-B27抗原（待測樣本）、生物素化的抗HLA-B27抗體、HRP標記的親和素，形成雙抗體夾心反應，經過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，在終止液的作用下最終化為黃色，顏色的深淺和樣本中的HLA-B27呈正相關。
優點：其結果與CDC檢測符合率為99%，且不受感染因素影響，重復性好。
缺點：準確度相對偏低，容易誤診、漏診。
03磁珠酶聯免疫分析法（IMS-ELISA）
通過經HLA-B27抗體包被的磁珠分離全血中帶有HLA-B27抗原的白細胞，同時以CD45-辣根過氧化物酶結合體來標示全血中的白細胞，最后經四甲基聯苯胺顯色而測定其結果。
優點：操作簡便，反應時間短，對標本新鮮度要求不高（2-8°C靜置一周內都可），需要樣本量少，結果客觀。
缺點：不適合大批量操作。
04流式細胞儀分析法（FCM）
利用熒光標記的HLA-B27單克隆抗體，與細胞表面的B27抗原結合，使結合后的淋巴細胞有一定的熒光強度，由流式細胞儀測得的通道值來反映，以其值的高低判斷HLA-B27抗原表達的百分比，從而判斷HLA-B27的陰陽性。
優點：全自動儀器檢測，克服了人為誤差，重復性高，結果判斷準確，為目前最理想的方法；
缺點：儀器昂貴，成本較高，只適合較大醫院應用，而且熒光易淬滅。與HLA-B7抗原有一定的交叉反應，容易出現假陽性。
05聚合酶鏈反應-序列特異性引物法（PCR-SSP）
通過設計基因序列特異的引物SSP，對待測DNA進行PCR擴增，從而獲得HLA型別特異性的擴增產物。
優點：標本不受時間限制，陳舊血、冷凍血也可用于DNA的提取；DNA可長期保存以供復核或送其他實驗室驗證；技術成熟，判斷結果客觀準確，特異性強，靈敏度高，穩定性好。
缺點：PCR-SSP檢測的是HLA-B27的基因型，攜帶B27基因并不等于細胞表面一定有HLA-B27抗原的表達。檢測HLA-B27抗原的表達即其表型，或許對臨床更有意義。
06實時熒光PCR法（RT-PCR）
在PCR反應液加入熒光染料，該染料能與雙鏈DNA特異性結合，通過實時檢測反應體系熒光信號強度，達到檢測PCR擴增產物的目的。
優點：直接檢測HLA-B27抗原的編碼基因，不會與HLA-B7產生交叉反應，能準確的作出判斷。
缺點：和PCR-SSP的缺點一樣，而且操作需要成本高，需要有專業的實驗室及人員。
6種方法在敏感性、特異性方面的對比：
通過對HLA-B27的檢測方法的分析，我們發現由于每種方法的特異性和敏感性的差異，有的方法學存在假陽性或假陰性的結果。每家醫院檢測的方法不一樣，得到的結果也會不一樣。和臨床醫生、病人在溝通的時候，我們也可以建議再用第三種方法檢測，以確證結果的準確性。也希望在未來，有更快捷、便宜、方便、合適、準確的方法問世，為病人、臨床服務！
參考文獻
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