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  • 發布時間:2019-09-13 13:42 原文鏈接: YAC實驗

    • YAC文庫構建

    • YAC文庫篩選

               

    實驗步驟

    1.  盡管當插入片段大于100 kb 時,YAC克隆是可供選擇的基因組DNA大片段克隆方法之一,但該系統的一些特性使之很難被迅速采納為常規克隆手段。

    2.  在復雜的釀酒酵母菌的基因組中,通常所用的YAC只是一個單拷貝。

    3.  因此在YAC文庫中鑒定一個克隆,其信噪比較之在λ噬菌體載體或粘粒載體文庫中鑒定同種的克隆更差。

    4.  同時,發展一種針對YAC的高密度篩選方法的努力一直步履維艱,僅取得了十分有限的成功,構建YAC文庫時不僅需要百倍的努力和巨大的投入,篩選文庫時還要耗費大量的人力物力。因此,如果研

    5.  究者希望獲得含特定序列DNA的YAC克隆,最為可行的方案是首先安排篩選在某中心實驗室保存的已有的文庫。

     

    6.  最初,YAC文庫是用整個棊因組DNA構建的。近來,也有利用攜帶特定染色體或部分染色體的體細胞雜合體構建文庫。

    7.  如果靶基因座在染色體上的位置是已知的,那么構建和篩選YAC文庫所耗費的人力物力將極大地減少。
     

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