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  • 發布時間:2019-09-13 15:58 原文鏈接: 血清總膽固醇的測定實驗

    • 無水乙醇提取法

               

    實驗方法原理 用無水乙醇提取血清中的膽固醇,同時沉淀蛋白質,向提取液中加入硫磷鐵顯色劑,膽固醇與濃硫酸及三價鐵作用,生成穩定的紫紅色化合物。與同樣處理的標準樣進行比色,求得其含量。
    實驗材料

    膽固醇  

    試劑、試劑盒

    膽固醇   顯色劑   濃硫酸   無水乙醇

    儀器、耗材

    722S 分光光度計     刻度吸管

    實驗步驟

    溶液配制:

    1. 膽固醇標準貯存液(1 ml中含1.0 mg):精確稱取干燥重結晶膽固醇100  ml,溶于無水乙醇內(因不易溶解,可稍加溫助溶),然后移入100 mg容量瓶中,加無水乙醇至刻度,貯于棕色瓶中,密塞瓶口置4  ℃冰箱中。配應用液時,應將其預先恢復至室溫。
     
    2. 膽固醇標準應用液(1 ml中含0.04 mg):取上述貯存液4  ml 于100 ml容量瓶中,用無水乙醇稀釋至100 ml刻度,貯存于棕色瓶中,放冰箱保存,使用時應先恢復至室溫。
     
    3. 鐵貯存液:稱取六水三氯化鐵2.5 g,溶于87%磷酸內,并磷酸加至100 ml,貯存于棕色瓶中,此液在室溫中可長期保存。
     
    4. 顯色劑:取鐵貯存液8 ml,加濃硫酸至100 ml,此液在室溫可保存6~8周。

    操作步驟:

    1. 取小試管1支,準確吸取0.1 ml 血清于管底,加入無水乙醇4.9 ml,混勻,靜置10 min,以2000 r/min 離心10 min。吸取上清液置另一潔凈的小試管中備用。
     
    2. 另取3支大試管標明“測定”、“標準”和“空白”并按下表配制。


    立即振蕩15~20 次,置室溫下冷卻10 min,以空白管調零點,用550 nm 波長進行比色,測定各管光密度。

    3. 計算

                展開


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