基本方案
| 實驗方法原理 |
直接測量己糖激酶的反應： D-葡萄糖＋ATP → 6-磷酸葡萄糖＋ADP 簡單的光度測量是達不到的，葡萄糖的磷酸化最好用測量磷酸或者 ATP32 標記的辦法。由于通過層析，G6P 的實驗必須完全與 ATP 和 ADP 分開，因此，建議應用 HPLC 方法。酶的實驗通常是酶與 G6P 脫氫酶反應偶聯:
D-6-葡萄糖＋ATP＋NADP＋ → 6-磷酸葡萄糖＋ADP＋NADPH＋H＋ 這些反應都已經通過光度測量實現。當使用這個偶聯的系統，首先應該單獨進行 G6P 反應實驗，然后在己糖激酶的存在下用葡萄糖和 ATP 取代 G6P 繼續反應。 |
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| 實驗材料 | 己糖激酶 |
| 試劑、試劑盒 | 三乙醇胺-HCl NaOH D-葡萄糖 ATP MgCl2 NADP 6-磷酸葡萄糖脫氫酶 |
| 儀器、耗材 | 分光光度計 |
| 實驗步驟 |
實驗所需「試劑」具體見「其他」 0.98 ml 實驗混合物
0.02 ml 酶樣品 25℃ 時，于 340 nm 處吸收值升高，ε340＝6.3×103 l/（mol·cm）。
展開 |
| 注意事項 | |
| 其他 |
試劑： 100 mmol/L 三乙醇胺-HCl/NaOH，pH 7.6（三乙醇胺-HCl，用 1 mol/L NaOH 調節） 1.0 mol/L D-葡萄糖（Mr＝180.2；18 g/100 ml） 0.1 mol/L ATP（二鈉鹽，三水合物，Mr＝605.2；605 mg 溶于 10 ml 水） 0.1 mol/L MgCl2（六水合物，Mr＝203.3；203 mg 溶于 10 ml 水中） 0.01 mol/L NADP（二鈉鹽，Mr＝787.4；79 mg 溶于 10 ml 水中） 6-磷酸葡萄糖脫氫酶（商業品有 100～500 U/mg，準備時稀釋至大約 5U/0.1 ml）
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