測定動物源食品中14種β內酰胺類獸藥殘留量實驗

動物肝臟 腎臟 肌肉 雞蛋 牛奶

乙腈 氫氧化鈉 磷酸緩沖液

雞心瓶 旋轉蒸發器 比色管 漩渦混勻器 離心管

1.  提取

動物肝臟、腎臟、肌肉組織：稱取5.0 g己粉碎樣品于50 mL離心管中，加入15 mL乙腈-水（15 + 2），均質提取30 s，4000 r/min離心5 min，清液轉移至50 mL比色管中；另取一離心管，加入10 mL乙腈-水（15 + 2），洗滌均質器刀頭10 s；用 玻棒搗碎離心管中的沉淀，加入上述洗滌均質器刀頭溶液，在旋渦混勻器上振蕩1 min，4000 r/min離心5 min （離心機溫度20 ℃），上清液合并至50 mL比色管中，重復用10 mL乙腈-水（15 + 2）洗滌刀頭和提取一次，合并定容至40 mL，取20 mL 至100 mL雞心瓶中。

雞蛋：稱取10.0 g樣品于50 mL離心管中，加入15 mL乙腈-水（15 + 2），均質提取30 s，4000 r/min離心5 min，清液轉移至50 mL比色管中；另取一離心管，加入10 mL乙腈-水（15+2），洗滌均質器刀頭10 s；用玻棒搗碎離心管中的沉淀，加入上述洗滌均質器刀頭溶液，在旋渦混勻器上振蕩1 min，4000 r/min離心5 min（離心機溫度20 ℃），上清液合并至50 mL比色管中，重復用10 mL乙腈-水（15 + 2）洗滌刀頭和提取一次，合并定容至40 mL，取20 mL至100 mL雞心瓶中。

牛奶：稱取10.0 g樣品于50 mL離心管中，加入20.0 mL乙腈，均質提取30 s，4000 r/min離心5 min，上清液轉移至50 mL比色管中；另取一離心管，加入10 mL乙腈-水（15+2），洗滌均質器刀頭10 s；用玻棒搗碎離心管中的沉淀，加入上述洗滌均質器刀頭溶液，在旋渦混勻器上振蕩1 min，4000 r/min離心5 min（離心機溫度20 ℃），上清液合并至50 mL比色管中，重復用10 mL乙腈-水（15 + 2）洗滌刀頭和提取一次，合并定容至50 mL，取25 mL至100 mL雞心瓶中。

雞心瓶置于旋轉蒸發器上（37 ℃水浴）蒸發至除去乙腈（易起沫樣品可加入4 mL飽和氯化鈉溶液）。

2.  凈化

立即向己除去乙腈的雞心瓶中加入25 mL磷酸鹽緩沖溶液（pH為8.5），渦旋混勻1 min，用0.1 mol/L氫氧化鈉調節pH值為8.5，以1 mL/min的速度通過經過預處理的固相萃取柱，先用2 mL磷酸鹽緩沖溶液淋洗2次，再用1 mL超純水淋洗。用3 mL乙腈洗脫（速度控制在1 mL/min）。將洗脫液于45 ℃下氮氣吹干，用25 mmol/L磷酸鹽緩沖溶液（pH為7.0）定容至1 mL。過0.45 um濾膜后，供液相色譜-串聯質譜測定。

3.  測定條件

色譜柱：COSMOSILC18柱，250 mm×4.6 mm，粒度5 um；

流動相：B組分是乙腈，A組分是0.01 mol/L乙酸銨（甲酸調pH至4.5），梯度洗脫；

流速：1.0 mL/ min；

柱溫：40 ℃；

進樣量：10 uL。