尼氏染色實驗

尼氏染色法(Nissl Staining)是用堿性染料染神經組織的一種方法。尼氏體是胞質內的一種嗜堿性物質，廣泛見于各種神經元，不同神經元中的尼氏體形狀、大小和數量則各有差異。用于尼氏染色的堿性染料主要有焦油紫、亞甲藍、甲苯胺藍和硫堇等。我室主要用焦油紫和硫堇染色。尼氏染色法可以染出尼氏體，用來觀察神經元內的細胞結構；還可以通過尼氏染色后對尼氏體的觀察來了解神經元的損傷情況

神經元

焦油紫 硫堇

(1)石蠟或冰凍切片依次經二甲苯、無水乙醇、95%酒精、80%酒精、70%酒精和蒸餾水，各自時間可以參考HE染色。

(2)1%焦油紫或1%硫堇染色10min至1h。

(3)蒸餾水清洗。

(4)70%酒精分色數秒至數分鐘。

(5)依次經70%酒精、80%酒精、95%酒精，各2min脫水。

(6)無水乙醇2次，每次5min。二甲苯2次，每次10min。

(7)DPX封片。尼氏體呈紫色、細胞核呈淡紫色

(1)切片若為石蠟切片，要在二甲苯中先脫蠟。

(2)焦油紫或硫堇的染色時間也是根據染液配制時間的新舊、切片厚度和環境溫度靈活掌握。

試劑準備：

(1)焦油紫溶液1g焦油紫溶于100ml蒸餾水，溶解后過濾待用。

(2)硫堇溶液1g硫堇溶于100ml蒸餾水，溶解后過濾待用。

(1)應該在顯微鏡下觀察分色程度，使尼氏小體呈深色而背底基本無色為最佳。如分色不夠，可以退回酒精再次分色。如分色過度，也可退回再染。

(2)尼氏染色應充分脫水，否則容易褪色。

(3)HE染色方法雖然也能觀察到胞質中嗜堿性顆粒，但結構不甚清晰，神經元的軸突、樹突難以辨認。在尼氏染色中尼氏體清晰可辨，而且很容易區分軸突和樹突。尼氏染色中尼氏體受染后呈塊狀（形如虎斑）或顆粒狀，核周圍尼氏體顆粒較大，近邊緣處較小而細長，如在生理情況下，尼氏體大而數量多，反映神經細胞合成蛋白質的功能較強，在神經元受損時，尼氏體的數量可減少甚至消失，實驗者可以根據實驗目的選擇HE染色和尼氏染色。