姊妹染色單體互換標本制備與分析實驗

人外周血

BrdU溶液 SSC Giemsa染液 PBS

紫外燈 恒溫水浴箱 培養皿 擦鏡紙

1.  培養液的制備、采血、培養等操作同常規染色體的制備。（見常規染色體標本制備方法）

2.  在外周血培養24小時加入BrdU溶液0.2毫升，使終濃度為每毫升培養液含8微克。加入BrdU后，用黑紙包褒培養瓶，置37℃溫箱中繼續培養48小時。

3.  秋水仙素處理方法同前（見染色體標本的制備）。

4.  按常規方法收集細胞、固定、低滲、制片，并將標本片置37℃溫箱中烘片24小時。

5.  將標本面朝上平放于染色槽中，然后加入2xSSC溶液，以溶液不超過標本表面為度。然后在標本上復蓋一張比標本稍大的擦鏡紙，使紙邊垂到2xSSC溶液中，用以保持標本濕潤。

6.  將染色槽置55℃恒溫水浴箱中溫育，上用30 W 紫外燈垂直照標本30分鐘，燈距標本距離約為10 cm。照射后輕輕取掉擦鏡紙，立即用蒸餾水沖洗標本。（水溫為40℃左右）。

7.  用Giemsa染液（原液用pH6.8磷酸緩沖液1：10配制），染色5~10分鐘左右，用自來水沖洗，空氣干燥后鏡檢。

8.  姊妹染色單體互換的鏡檢分析及頻率計算

（1）在正常或異常情況下，姊妹染色單體互換的頻率不同。根據上述標本染色單體的明顯色差不同，通過計數可較準確檢測姊妹染色單體之間的互換頻率。

（2）選取染色體分散良好，兩條姊妹染色單體染成一深一淺的中期相，凡發生有姊妹染色單體互換的染色體，可見在深染的染色單體上出現淺染的片段。對在染色體端部出現的互換計為一次（一個SCE）；對在染色單體中間出現的互換計為兩次（2個SCE）；對在著絲粒部位的，經判明不是兩條染色單體發生扭轉者，計為一次（1個SCE）。

（3）計數30個中期分裂相的SCE后，計算SCE的頻率。

①SCE頻率=n個中期相SCE之和/n個細胞

②中國人正常SCE頻率為5.7 ± 0.4