飼料中金霉素含量測定，目前常用的測定方法有高效液相色譜法(HPLC)和微生物法。微生物法較為經典、成本低，但受一些有抗菌活性雜質影響，金霉素含量不一定準確。高效液相色譜法靈敏度高、專屬性強，能夠更好地控制四環素、差向金霉素等雜質的含量。
GB/T19684-2005《飼料中金霉素的測定高效液相色譜法》
色譜條件
色譜柱：Hitachi LaChrom C18(5μm) 4.6mmI.D.x250mmL
柱溫：25℃
流速：1.0 mL/min
檢測波長：375nm
進樣量：20μL
流動相：0.01M草酸水溶液：乙腈:甲醇=77：18：5
溶液制備
準確稱取一定量金霉素標樣于10ml容量瓶，用甲醇溶解并定容，作為貯備液；然后稀釋得到濃度為10μg/ml的標準品溶液，用0.45μm濾膜過濾，進樣測定。
準確稱取10g飼料樣品于250mL具塞錐形瓶中，準確加入100ml 0.05mol/L鹽酸溶液，超聲提取10min后靜置，取上清液于離心管中，10000轉/分鐘離心5min，用0.45μm濾膜過濾，進樣測定。
儀器
1)四元梯度泵PM1110
2)自動進樣器PM1210
3)柱溫箱PM1310
4)紫外檢測器PM1410
5) PM色譜工作站。
1、標樣測定
根據GB/T19684-2005的色譜條件，調節乙腈、甲醇和草酸溶液的比例，在草酸水溶液：乙腈:甲醇=77 : 18 : 5的條件下，實際樣品中金霉素和雜質峰的分離很好，因此選擇該比例進行實驗，出峰時間為9.66min，圖1為金霉素標樣的色譜圖。
圖1金霉素標樣色譜圖
2、檢出限
對標準溶液逐級稀釋，在信噪比S/N=3時得到金霉素的檢出限為0.05μg/ml。
圖2檢出限色譜圖
3、重復性實驗
對金霉素標樣溶液重復進樣6次，6針峰面積的相對標準偏差為0.13%，重現性很好，結果見下表
表1金霉素標樣6針峰面積的重現性
4、飼料樣品檢測
豬飼料經前處理后測定，在9.66min未檢測到金霉素殘留，實驗結果見圖3。
圖3飼料樣品與加標樣品重疊色譜圖
采用日立Primaide高效液相色譜儀四元梯度配紫外檢測器，準確地測定了金霉素的含量，在上述色譜條件下和雜質得到很好的分離，重現性良好，最低檢測限可達到0.05μg/ml；對飼料樣品中該項目進行了檢測，未檢出金霉素殘留，方法簡便實用，紫外檢測器靈敏度高，適用于常規限量檢測。