制備肌動蛋白實驗

肌球蛋白

肌球蛋白抽提溶液

離心機

1. 抽提肌球蛋白時得到的沉淀物用 3 倍于沉淀物體積的肌球蛋白抽提溶液抽提 10 分鐘。

肌球蛋白抽提溶液：

0.5 mol/L KCl

0.1 mol/L K₂HPO₄

2. 抽提物離心（GSA 轉頭，13000 r/min，17310 g）15 分鐘，去掉上清。

3. 在肌肉殘渣中加 1 L 冷的 dH₂O，攪拌，然后用 1 mol/L Na₂CO₃ 調 pH 到 8.2~8.5。

把混和物分到 6 個 250 ml 的瓶中，離心（GSA 轉頭，13000 r/min，17310 g）15 分鐘離下含肌動蛋白的不溶物。

4. 去掉上清。然后如步驟 3 所述再次離心。倒掉上清并用合適的記號筆畫出沉淀物的輪廊（這可以在以后的步驟中確定什么時候沉淀物開始漲大）。加足量冰冷的 dH₂O 裝滿離心瓶以重懸沉淀物。大概重復 4 次直到沉淀物開始漲大。

5. 沉淀物一開始漲大，不管用水洗的次數是多少，都接著進行下個步驟。

6. 在 250 ml GSA 離心桶中用冰冷的丙酮重懸肌肉殘渣，劇烈攪拌大約 20 分鐘。

7. 離心（CSA 轉頭，13000 r/min，17310 g）沉淀 15 分鐘并去掉上清。此外，沉淀可以在 Bounce 漏斗上過濾。

8. 重復步驟 6 和 7。

9. 把沉淀的蛋白鋪在濾紙上（例如 Whatman 3MM ) 并讓它在室溫過夜干燥。

10. 第二天，如步驟 6 所述的那樣，把干了的丙酮粉重懸在氯仿里并離心以去掉多余的脂肪。過濾并干燥沉淀。