一、目的
1、掌握分光光度法測定食品中鉛含量的方法。
2、熟悉樣品處理方法。
二、原理
樣品經消化后，在PH8.5-9.0時，鉛離子與雙硫腙生成紅色絡合物，溶于三氯甲烷，絡合物顏色的深淺與樣品中鉛的含量成正比。反應式如下：
三、試劑
1.氨水(1＋1)：氨水與水等體積混合。
2.6mol/L鹽酸：量取100ml鹽酸，加水稀釋至200ml。
3.酚紅指示液：1g/L酚紅乙醇溶液。
4.20%鹽酸羥氨溶液：稱取20g鹽酸羥氨，加水溶解至約50ml，加2滴酚紅指示液，加(1+1)氨水，調PH至8.5-9.0(由黃變紅，再多加2滴)，用雙硫腙-三氯甲烷溶液提取至三氯甲烷層呈綠色不變為止，再用三氯甲烷洗兩次，棄去三氯甲烷層，水層加6mol/L鹽酸呈酸性，加水至100ml。
5.20%檸檬酸銨溶液：稱取50g檸檬酸銨，溶于100ml水中，加2滴酚紅指示劑，加(1＋1)氨水調PH8.5-9.0，用雙硫腙-三氯甲烷溶液提取數次，每次10-20ml至三氯甲烷層綠色不變為止，棄去三氯甲烷層，再用三氯甲烷洗兩次，每次5ml，棄去三氯甲烷層，加水稀至250ml。
6.10%氰化鉀溶液。
7.三氯甲烷：不應含氧化物。
檢驗方法：量取10mL三氯甲烷，加25mL新煮沸過的水，振搖3min，靜置分層后，取10mL水液，加數滴15%碘化鉀及淀粉指示液，振搖后應不呈蘭色。
處理方法：在三氯甲烷中加入1/10~1/20體積地20%硫代硫酸鈉溶液洗滌，再用水洗后加入少量無水氯化鈣脫水后進行蒸餾，棄去最初及最后的蒸餾液，收集中間餾出液備用。
8.淀粉指示液：稱取0.5g可溶性淀粉，加5ml水攪勻后，慢慢倒入100ml沸水中，隨倒隨攪拌，煮沸，放冷備用。
9.10g/L硝酸：量取1ml硝酸加水稀釋至100ml。
10.雙硫腙三氯甲烷溶液：保存冰箱中，必要時用下述方法純化。
稱取0.5g研細的雙硫腙溶于50ml三氯甲烷中，如不全溶，可用濾紙濾于250ml分液漏斗中，用(1+99)氨水提取3次，每次100ml，將提取液用棉花過濾至500ml分液漏斗中，用6mol/L鹽酸調至酸性，將沉淀出的雙硫腙用三氯甲烷提取2~3次，每次20ml，合并三氯甲烷層，用等量水洗滌兩次，棄去洗滌液，在50℃水浴上蒸去三氯甲烷。精制的雙硫腙置硫酸干燥器中，干燥備用。或將沉淀出的雙硫腙用200、200、100ml三氯甲烷提取三次，合并三氯甲烷層為雙硫腙溶液。
11.雙硫腙使用液：吸取1.0ml雙硫腙溶液，加三氯甲烷至10ml混勻。用1cm比色杯，以三氯甲烷調零點，于波長510nm處測吸光度(A)，用下式算出配制100ml雙硫腙使用液(70%透光率)所需雙硫腙溶液的毫升數V。
V= (3-14)
12.鉛標準溶液：精密稱取0.1598g硝酸鉛，加10ml 1%硝酸，全部溶解后，移入100ml容量瓶中并加水稀釋至刻度。此溶液每毫升相當于1mg鉛。
13.鉛標準使用液：吸取1.0ml鉛標準液移入100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度。此溶液每毫升相當于10μg鉛。
四、操作方法
1.樣品處理：
(1)硝酸—硫酸消化法：根據樣品含水分的多少來確定取樣量的不同。含水分較多的果蔬類稱取25.0~50.0g洗凈并打成勻漿的樣品；飲料類可吸取10.0~20ml樣品；含水分較少的固體樣品可吸取5.0~10.0g的粉碎樣品
將試樣轉移入250~500ml定氮瓶中，對干燥的試樣可先加少許水濕潤。加數粒玻璃珠、10~15ml硝酸，放置片刻，在通風櫥內小火緩緩加熱，待作用緩和，放冷。沿瓶壁緩慢加入5ml或10ml硫酸，再繼續加熱，至瓶內液體開始變成棕色時，不斷沿瓶壁滴加硝酸至有機質分解完全。加大火力，至產生白煙，此時溶液應透明并無色或微帶黃色，放冷。在消化過程中應注意控制熱源強度。
在瓶中加入20ml水并煮沸，至產生白煙為止(除去殘余的硝酸)，如此處理兩次，冷卻。將溶液移入50ml或100ml容量瓶中，用水洗滌定氮瓶，洗液并入容量瓶中，冷卻后加水至刻度，混勻。此液每10ml相當于1~5g樣品，相當加入硫酸量1ml。
取與消化樣品相同量的硝酸和硫酸，按同一方法作試劑空白試驗。
(2)灰化法：稱取5.0g或吸取5.0ml樣品(液體樣品應先在水浴上蒸干)置于坩堝中，加熱至炭化。在高溫爐內灰化3h，取出放冷后，加入1ml硝酸潤濕灰分，用小火蒸干，在550℃下灼燒1h，放冷，取出坩堝。然后加入1ml(1+1)硝酸，加熱使灰分溶解，移入50ml容量瓶中，用水洗滌坩堝，洗液并入容量瓶中，加水至刻度，混勻備用。
2.測定
吸取10.0ml消化液和相同量的試劑空白液，分別置125ml分液漏斗中，各加水至20ml。分別依次加入200g/L檸檬酸銨溶液20ml、200g/L鹽酸羥胺溶液1ml和2滴酚紅指示液，用(1+1)氨水調至紅色，再各加100g/L氰化鉀溶液2ml，混勻。各加入5.0ml雙硫腙使用液，劇烈振搖1min，靜置分層后，將三氯甲烷層經脫脂棉濾入1cm的比色杯中，以零管調節零點，在波長510nm處測吸光度。吸取0.00、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50ml鉛標準使用液(相當0、1、2、3、4、5μg鉛)，分別置于125ml分液漏斗中，各加入1%硝酸溶液至20ml。以下按樣品溶液依次處理，然后分別測定吸光度，繪制標準曲線。
五、結果計算：
X= (3-15)
式中：X—樣品中鉛的含量，mg/kg或mg/L；
A1—測定用樣品消化液中鉛的含量，μg；
A2—試劑空白液中鉛的含量，μg；
m—樣品質量(體積)，g(ml)；
V1—樣品消化液的總體積，ml。
V2—測定用樣品消化液的總體積，ml。
注意事項：
1.雙硫腙 學名二苯基硫卡巴腙(Dithizone，又名：打薩腙，二苯磺腙等。代號H2Dz或Dz)。
藍黑色或紫色結晶粉末，難溶于水，能溶于堿性水溶液中，可溶于大多數有機溶劑中，并呈綠色。
雙硫腙能與許多金屬形成絡合物，這些絡合物能溶于三氯甲烷或四氯化碳并且呈現顏色。若控制一定的反應條件，則可提高雙硫腙對重金屬的選擇性，常用的控制方法是控制溶液PH值或加入適當的掩蔽劑，從而可用雙硫腙比色法對食品中的多種微量礦物質元素進行測定。
市售的雙硫腙常含有氧化生成的二苯硫卡巴二腙，此化合物不與金屬元素形成絡合物，但能溶于氯仿或四氯化碳呈黃色或棕色，干擾測定，因此對市售雙硫腙要進行提純處理。方法如下：
稱取1g雙硫腙，加入200ml四氯化碳或氯仿使其溶解，移入500ml分液漏斗中，加入(1+100)氨水溶液200ml，振搖數次，此時雙硫腙在氨水溶液中，氧化物殘留在有機溶液中。再用(1+100)氨水溶液對有機溶液層進行數次提取，至氨液不變橙色為止。合并氨水層，加(1+1)鹽酸中和并使其呈酸性，此時雙硫胺沉淀析出，再加入四氯化碳或氯仿20ml抽提3次，收集抽提液于另一分液漏斗中，用水洗滌數次，將抽提液移入三角瓶中，先回收四氯化碳，再在水浴上蒸去殘留的四氯化碳，在干燥器內干燥備用。
2.純雙硫腙(或其溶液)應在低溫(4~5℃)下避光保存以免被氧化。
3.在測定過程中，溶液的PH值對其影響較大，應控制PH8.5~9.0內。
4.所用試劑應盡可能作提純處理。檸檬酸銨、雙硫腙必須提純，其余試劑可根據試劑等級或通過空白試驗，再決定是否需要提純。
5.儀器在使用之前，應用10%~20%硝酸處理，再用無鉛水沖洗，以防止其對結果的影響。