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  • 發布時間:2019-09-21 15:26 原文鏈接: 手動進樣真有你想象的那么簡單?

      目前很多制藥企業都主要以自動進樣為主,只有學校和一些中小型的第一方實驗室使用手動進樣。部分實驗用的就是手動進樣。關于造成實驗數據重復性差原因一般是:1進樣量不合適; 2所用進樣針刻度不準;3進樣針里有起泡;4進樣口松動,針插不緊;5進樣針太細,插不緊;6轉子密封墊臟、磨損或漏液;7進樣方法不正確。可以自己對照逐個排除。那么如何將這些原因一一排除呢?

      進樣量的把握

      以20ul原配樣品環為例,部分注入樣品進樣體積在5-15ul重現性好,建議10ul。全部注入樣品進樣體積以20*4,即80ul重現性好,就是要達到樣品環體積4倍以上。

      手動進樣步驟:

      1吸樣后擦針、排氣泡;2進樣狀態(inject)下插針到底部;3快速切到裝填(load)狀態;4較快勻速推針桿,注入樣品;5快速切回inject;6拔針。步驟要牢記,速度要把握好,熟練才是最好的。


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      使用及保養事宜

      1、手柄處于Load和Inject之間時,由于暫時堵住了流路,流路中壓力驟增。再轉到進樣位,過高的壓力沖擊在柱頭上會造成損壞,所以應盡快轉動閥,不能停留在中途。

      2、注射器針頭有別于氣相色譜,是平頭注射器。平針頭的優點:A:針頭外側緊貼密封墊內側,密封性能好,不漏液,不引入空氣。B:防止針頭刺壞密封墊及劃傷定子。應該注意選擇質量好的液相色譜專用注射器。

      3、裝液量有部分裝液法和完全裝液法兩種。A:部分裝液法進樣時,進樣量最多為定量環體積的75%。B:完全裝液法進樣時,進樣量最少為定量環體積的3至5倍。這樣才能完全置換定量環內殘留的溶液。

      4、可根據進樣體積的需要選擇定量環,一般不要求精確計算定量環的體積。譬如,一根名義上10uL的定量環,實際是9uL還是11uL并不重要,因為被測樣品和校正樣品的進樣體積保持一致,在計算結果時誤差都被抵消了。

      5、樣品溶液均要用濾膜過濾。防止微粒阻塞進樣閥和減少對進樣閥的磨損。

      6、每天使用后應沖洗進樣器,通常用適當的有機溶劑、水或不含鹽的流動相沖洗,在進樣閥的Load和Inject位置反復沖洗。

      7、注意擦拭注射器針頭的外側。防止交叉污染。

      氣相手動進樣之技巧

      1、進樣速度要快。取樣后,一手持注射器,另一手保護針尖(防止插入時彎曲),小心地將針頭穿過隔墊,隨即以最快的速度將注射器插到底,同時迅速將供試品注射入汽化室,然后快速拔出注射器。

      2、取樣量要準確。

      3、為避免供試品之間的相互干擾。取樣前先用供試品溶劑洗針至少3次(抽滿針管的2/3,再排出),再用要分析的供試品洗針至少3次。

      4、選用合適的注射器。GC分析最常用的是10μl微量注射器,其進樣量一般不要小于1μl。進樣量要控制在1μl以下,就應采用5μl或1μl的注射器,由于此類注射器往往是將供試品抽在針尖內,取樣時應反復推拉針芯,以確保針尖內沒有氣泡。

      5、微量注射器用后必須用甲醇等有機溶劑清洗干凈

      扎針時感覺進樣墊較緊,則注樣后拔針可快;若扎針時感覺進樣墊較松,則注樣后拔針可慢點。尖頭注射器進樣如果遇到有堅硬阻力,切莫拔針;而是將注射器向左或右旋轉下繼續扎針。尖頭注射器如果被硅膠未堵住針尖,則可將針桿拔出,再重新將針桿放入注射器孔內,利用空氣的壓縮性快速將硅膠未排出針尖;如果還不行,則將針尖扎到高溫汽化室內,針尖高溫下再排空,一般可用空氣擠出針尖硅膠未。以上二方法還不能見效,則可用酒精燈或打火機燒紅你的針尖,再排空。

      HPLC手動進樣器的清洗

      手動進樣閥的清洗,一般來說目的就是為了消除交叉污染或樣品的殘留產生鬼峰從而造成進樣重復性變差等問題。一般來說我們采用的進樣方式都為在inj狀態下進針,然后轉換到load狀態進樣,然后轉換到inj狀態,然后拔針。這種進樣方式樣品的主要殘留在自進樣口到轉子密封這一段。沖洗方式為:采用閥自帶的針孔清潔器用不含鹽的流動相,在load和inj兩種狀態反復沖洗沖洗目的不是為了沖洗定量環,而是為了沖洗自進樣口至轉子密封這一段,和廢液管。

      固定的沖洗可以沖掉進樣口粘附的樣品及可能的鹽,樣品殘留可能影響第二針的測定結果,鹽殘留可能磨損定子和轉子之間的光滑面。具體先后吸超純水和色譜純甲醇沖洗。一般在關閉儀器后再清洗,因為有些六通閥帶有觸發開關,你在扳動六通閥的時候,梯度程序會自動啟動。還有在進一針高濃度的樣品后一般要沖洗。


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