食品中六六六和滴滴涕檢測方法的優化

摘 要：采用有機試劑提取、濃縮、凈化，把食品中殘留的六六六、滴滴涕分離出來，用氣相色譜電子捕獲檢測器分析檢測。該方法峰形良好，檢測時間短，其科學性、準確性、高效性都完全優于常規的4種國家標準檢測方法。六六六的回收率為98%～101%，RSD為0.26%；滴滴涕的回收率為98%～102%，RSD為0.32%，因此，在食品中六六六、滴滴涕的檢測中具有重要的實際指導意義。

關鍵詞：六六六；滴滴涕；科學性；準確性；高效性；指導意義

六六六的成分是六氯環己烷，對昆蟲有觸殺、熏殺和胃毒作用，過去主要用于防治蝗蟲、稻螟蟲、小麥吸漿蟲、蚊、蠅、臭蟲等。六六六是屬于神經及實質臟器一般毒性作用的毒物，大劑量可造成中樞神經及某些實質臟器的損傷，特別是對肝臟與腎臟的嚴重損害。滴滴涕又名雙對氯苯基三氯乙烷，也是一種神經性毒劑，幾乎對所有的昆蟲都有很強的效用，并且對瘧疾、痢疾等疾病有良好的作用，同時還能夠讓農作物增產。六六六、滴滴涕均屬于有機氯農藥，化學穩定性好、難降解、脂溶性大、易在脂肪組織中積累造成慢性中毒，從而對自然環境造成了污染，對動物和人類造成了危害。上個世紀60年代以來，六六六、滴滴涕被很多國家從人體、牛奶、禽蛋等上發現都有高殘留，引起了全世界的重視。由于六六六、滴滴涕均屬于神經及實質臟器毒物，并且可致癌，我國在上個世紀80年代初就已經禁止使用，因為由于我國30多年來長期使用這兩種農藥，不僅農、林、畜產品受到嚴重的殘留污染，而且土壤、水等環境中都有較高的殘留，很容易通過環境遷移到植物當中，進入食物鏈進行富集，從而影響人類健康，所以六六六、滴滴涕仍是我國食品中有機氯農藥殘留的主要檢測項目。目前食品中六六六、滴滴涕殘留量的檢測方法有氣相色譜法[1-11]、氣質聯用法[12-16]等，但是普遍存在前處理繁瑣，基質效應影響大，雜質干擾等問題。目前經常使用的是氣相色譜電子捕獲檢測器檢測法。氣相色譜-質譜聯用法基質干擾小，檢測靈敏度高，檢出限低，但是價格比較貴，限制了其應用。GB/T 5009.146-2008《植物性食品中有機氯和擬除蟲菊酯類農藥多種殘留量的測定》、GB/T 5009.19-2008《食品中有機氯農藥多組分殘留量的測定》、NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留的測定》、GB/T 5009.162-2008《動物性食品中有機氯農藥和擬除蟲菊酯農藥多組分殘留量的測定》是檢測有機氯農藥常用的4種國家標準[17-20]，按照以上標準試驗發現普遍存在峰形不好，檢測時間較長，分離效果差等問題，根據反復試驗不斷優化檢測條件，摸索出了檢測峰形良好，檢測時間短的方法，尤其是將檢測時間優化為10min，極大的提高了檢驗檢測的準確度和效率，對于日常食品中六六六、滴滴涕的檢測具有現實指導意義。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

六六六（標準品，100μg/mL）、滴滴涕（標準品，100μg/mL）：國家環境監測研究院；30℃～60℃石油醚（色譜純，99.5%）、丙酮（色譜純，99.5%）、氯化鈉（分析純，99.5%）：天津市科密歐化學試劑有限公司；己烷（色譜純，99.5%）、乙酸乙酯（色譜純，99.5%）、環己烷（色譜純，99.5%）：德國默克化學試劑有限公司。

1.2 儀器與設備

島津GC-2014C氣相色譜（電子捕獲檢測器ECD）：日本島津公司；XB220A型電子天平：深圳市朗普電子科技有限公司；KH5200DB型超聲波清洗器：上海喬楓實業有限公司；Advanced-Ⅱ-12高純水機：成都唐氏康寧科技發展有限公司。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件和參數

色譜柱：ZKAF-RPAI（30 m×0.32 mm×0.25 μm 毛細管柱）；進樣口溫度：290℃，檢測器溫度：295℃，柱溫：245℃（恒溫）；分流比：10∶1；載氣：氮氣，純度≥99.999%，流速為30mL/min。

1.3.2 標準曲線繪制

分別儲存在-5℃以下冰箱中濃度為100μg/mL的六六六、滴滴涕標準溶液，用正己烷逐級稀釋到濃度為 0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μg/mL 的標準工作液，經0.2μm濾膜（Noly）過濾后由濃度低到高分別取1 μL注入色譜儀進行檢測，測定峰面積，以峰面積對濃度（μg/mL）作標準曲線。

1.3.3 樣品處理及測定

稱取1 g～10 g樣品（精確至 0.01 g），加入 2.5mL水，加入20mL丙酮，振蕩30min，加入3 g氯化鈉，再加入15mL石油醚（沸程30℃～60℃），再振蕩30min。靜置分層后，轉有機相于玻璃器皿中，用水浴蒸近干，加入10mL乙酸乙酯-環己烷（1+1），濃縮，重復3次，最后定容至5mL。將5mL試樣注入凝膠滲透色譜柱（GPC），用乙酸乙酯-環己烷（1+1）洗脫，將收集的流分濃縮約1mL，用氮氣吹近干，用正己烷定容至1mL，用0.2 μm有機濾膜過濾，上氣相色譜儀分析，根據保留時間定性，外標峰面積定量。

2 結果與分析

六六六的熔點159℃～160℃，沸點288℃；滴滴涕的熔點：108℃～109℃，沸點：260℃，為了保證六六六、滴滴涕能夠迅速的被氣化，并且不分解，以進樣口的溫度要稍微高于288℃，但是不能太高，經過試驗290℃就能完全滿足試驗要求，檢測器的溫度一般和進樣口溫度等同，經過試驗295℃最佳。柱溫一般比進樣口溫度低30℃～70℃，也就是柱溫在220℃～260℃，經過多次試驗，柱溫為245℃時效果最佳。為了防止溶劑峰對目標物質峰的影響，進行分流，在多次試驗分流效果后確定分流比為10∶1為最佳。圖1、圖2、圖3、圖4、圖5分別是優化的方法、GB/T 5009.19-2008《食品中有機氯農藥多組分殘留量的測定》、GB/T 5009.162-2008《動物性食品中有機氯農藥和擬除蟲菊酯農藥多組分殘留量的測定》、NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留的測定》、GB/T 5009.146-2008《植物性食品中有機氯和擬除蟲菊酯類農藥多種殘留量的測定》5種檢測方法的色譜圖。

從5種方法的色譜圖可以清晰的看出本試驗方法能夠完全將4種六六六和4種滴滴涕分離開來，并且峰形良好，可以準確的定性、定量，分析時間僅為10min。方法GB/T 5009.19-2008也可以將六六六、滴滴涕分離開來，但是峰形較小，分析時間很長需要55min。方法GB/T 5009.162-2008方法和GB/T 5009.19-2008基本接近，也可以將六六六、滴滴涕分離開來，但也是峰形較小，分析時間很長需要60min。NY/T 761-2008不能完全將六六六、滴滴涕分離，不能夠準確的定性和定量，分析時間較長為30min；方法GB/T 5009.146-2008也不能將六六六、滴滴涕分離，不能夠準確的定性和定量，分析時間較長為30min。表1是對5種方法的綜合性統計。

圖1 優化方法譜圖
Fig.1 Optimization method spectrogram

圖2 GB/T 5009.19-2008方法譜圖
Fig.2 GB/T 5009.19-2008 method spectrogram

圖3 GB/T 5009.162-2008方法譜圖
Fig.3 GB/T 5009.19-2008 method spectrogram

圖4 NY/T 761-2008方法譜圖
Fig.4 NY/T 761-2008 method spectrum

圖5 GB/T 5009.146-2008方法譜圖
Fig.5 GB/T 5009.146-2008 method spectrum

表1 5種檢測方法統計表
Table 1 Statistical table of five detection methods

從圖譜及統計表可以看出本方法采用ZKAF-RPAI毛細管柱，進樣口溫度290℃，檢測器溫度295℃，柱溫245℃（恒溫），分流比10∶1，檢測效果完全優于其它4種國家標準。通過加標試驗和重復性試驗可得六六六的回收率為98%～101%，RSD為0.26%；滴滴涕的回收率為98%～102%，RSD為0.32%。

3 結論

本文建立了一種科學、高效、便捷的利用氣相色譜法檢測食品中六六六、滴滴涕的方法，不論是檢測的科學性、準確性、高效性上都優于常規國家標準的方法，還是樣品的提取和檢測過程都比國家標準簡便，檢測方法易于掌握，具有很強的實用性，對于食品檢測方法的更新具有很好推進作用。

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