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  • 發布時間:2019-10-11 09:27 原文鏈接: Millipore密理博純水系統常見問題集(四)

    4.  為什么PE水箱有一個通氣口?
    一個空的PE水箱實際上并不是“空的”,它充滿了空氣。注水過程中,水代替氣體。小小的出氣口可以排放去氣體,避免水箱中的壓力過大。
    取水過程中,  等量的氣體進入水箱填補流出的水。這樣空氣就把水壓到取水口。由于在大氣壓下取水, 水箱中沒有壓力堆積(pressure  buildup)。
    有一種加壓水箱叫氣囊水箱(bladder tank);  內裝一個膨脹的與亞舉定西橫膈膜(氣囊內膽)。
    泵往水箱的進水口送水。泵工作時,進水撐開橫膈膜(氣囊),取代氣囊中的氣體的位置。水箱中注滿水的時候,在水箱里面形成氣囊中的空氣壓。氣壓控制水壓。當氣壓達到上限時,控制開關關閉泵。一旦關閉泵,卸壓閥就打開,保護系統。
    打開取水口,氣囊就會反應,水箱中的氣壓下降。當氣壓達到下限時,控制開關會再次啟動泵,再次給系統加壓。
    5.  為什么水箱從下面往上注水?
    PE水箱從下往上注水。這樣可以避免濺起水花。只要水中有一點點細菌,他們就有可能借此而覆著在水箱的內壁,在水箱內表面形成菌膜。
    6.  如果用肥皂水清洗了水箱,我們如何確定水箱中無TOC?水箱中的TOC會增加儲存水的TOC水平嗎?
    可以使用無泡肥皂水進行水箱的常規清洗。水箱可以每個月清洗一次,以防水箱內部積累灰塵、污垢。
    使用  1% , 1 N , HNO3 (硝酸) 能去除清潔劑,之后需用大量純水沖洗。  這樣子就可以保證不會有有機物(來自表面活性劑/肥皂)進入到超純水系統中。
    建議使用苛性蘇打(而不是氯)清洗水箱以去除菌膜。氯會和水箱的塑料材料反應。
    NaOH  是一種能有效去除熱源,菌膜和細菌的化學物質。
    7. Millipore 純水儲存箱殺菌后之殘留藥物檢驗方法?
    因Millipore  建議使用NaOH(氫氧化鈉)為水箱殺菌,在殺菌狀態下酸堿值會在11.5左右,但經過兩次連續的進水/放水之后,檢查酸堿值,如低于7以下,則符合USP24  (stage 3)的純水規范,證明無殘留物。
    實際上,NaOH的使用會有兩種影響, 一是Na+, 一是酸堿值(OH–)。   當使用者取用超純水,18.2MΩ的儀表顯示足以證明Na+的濃度已降至1ppb(0.01)以下,而酸堿值則可輕易的利用pH meter   來檢測,實際上空氣中的二氧化碳溶于水中所產生的H+足以平衡OH-所產生的影響,并能呈現酸堿值低于7的狀態。
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    1.4(超)純水系統維護
    1.  為什么建議在純水系統停用期間冷藏純化柱?
    離子交換柱是一種半水化的形式 .  如果不冷藏,樹脂可能脫水。一旦離子交換柱脫水,其離子交換能力失效。
    有時細菌會殘留在樹脂顆粒中。在正常室溫下殘留下來的細菌會滋生擴散而堵塞整個柱子。  防止細菌滋生的一個辦法就是冷藏法。
    因此,儲存期間,建議將離子交換柱包好并置于冰箱冷藏(4-8°C)。
    2.  如何清除聚乙烯PE管路中的細菌?
    如果查明PE管路中確實有細菌,可以3種處理方法:
    用水沖洗PE管路。
    120℃高溫滅菌20分鐘。
    或者更換PE管路。
    3.  多長時間清洗一次反滲透膜?
    如果是因為反滲透膜被阻塞而需要清洗,那么用兩種清洗劑(清洗劑A和清洗劑B)可以解決絕大多數問題。
    把袋裝的化學試劑送入消毒口,然后啟動清洗循環(持續90分鐘),清洗循環結束后,系統自動進入待機(Stand  By)模式。
    此清洗循環操作不要定期進行,建議當系統的流速明顯下降時——這表明反滲透膜被阻塞了——才進行清洗循環操作。
    還有一種殺菌用的氯試劑片,也從消毒口投入。它在中性或者酸性液體環境中會生成次氯酸,能有效的殺滅細菌。建議每四周進行一次氯試劑消毒。
    4.  氯是聚酰胺反滲透膜的天敵。為什么還使用氯來去除RO膜表面的細菌?
    氯是聚酰胺 RO 膜的天敵。因為氯會氧化聚酰胺的結構,形成膜中的“孔”。這個過程不可逆,  影響RO純化柱的截流率。 Elix, RiOs系統的進水中氯的含量應該小于3ppm。  自來水中的氯,是由當地相關部門加入用于去除細菌,這可以被Progard柱中的活性炭去除。
    水中氯的影響:
    氯與水反應生成次氯酸
    CL2 +  H20--- HOCl + H+ +Cl-
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    低pH值有利于次氯酸的形成。 在較高的pH值環境下,次氯酸分解形成次氯酸根。
    HOCl  --- OCl- +H+
    次氯酸的殺菌能力很強。它可以穿透細胞壁,破壞細胞。次氯酸根比次氯酸的氧化能力強100倍。高pH值可導致氯和RO  膜的氧化反應但不利于滅菌,而低pH值利于滅菌,但不利于RO純化柱的氧化。
    水中的氯是由次氯酸鈉(NaOCl)帶入
    NaOCl + H20 ---  NaOH + HOCl
    隨著pH值升高,分解出更多的次氯酸根。 pH值為7.5時,次氯酸和次氯酸根離子的含量相等。pH  值為10時,次氯酸根的含量最高。
    因此,建議在pH值為7的情況下,清洗RO膜。這樣可以保證有足夠的次氯酸進行消毒,同時又不會有過多的次氯酸根離子破壞聚酰胺膜。
    5.  我用去離子水作為Milli-Q  Academic系統的進水。問題:我的Millipak每15天要換一次。
    去離子純化技術僅僅可除去原水中的離子污染物和一些帶電荷的有機物。它并不能除去水中大部分的有機物和顆粒。因此,可能得到低電導率的水,但是顆粒物含量卻很高。
    Millipak最常見的堵塞可能由于顆粒物的填充。
    解決方法是用RO或者Elix產水代替去離子水,Progard柱能除去3μm和1μm的顆粒。RO膜能除去99%的顆粒。
    6.  為什么我的Milli-Q Biocel(已經使用了兩年)無法提供無RNA酶的水?
    每隔一段時間,Milli-Q  Biocel內置的超濾(UF)膜上截流的熱源和細菌會形成菌膜,變成污染源。因此,定期的對超濾(UF)柱進行衛生處理非常重要。建議每四周進行一次這樣的衛生處理。
    7.  怎樣除去UF柱上的熱源?
    UF柱在常規的應用中可能會不斷被進水中的膠體和顆粒污染物所污染,從而降低產水流速。清洗可以恢復流速,如果無效,就需要從機器里取出UF柱,按下面步驟清洗:
    按40  克NaOH (藥片):1升Milli-Q  進水的比例配制1N的NaOH溶液
    取下UF柱,在溶液中浸泡至少12小時。
    重新安裝UF柱,斷開通往終端過濾器的出水管,取下終端過濾器,打開三通閥。
    沖洗柱子至少5分鐘,打開,關閉UF柱上的沖洗閥直到產水的pH小于7。當所有的氫氧化鈉被沖洗掉后,使系統返回正常操作狀態。
    8.  為什么 Mill-Q Biocel / Synthesis中的  UF柱清洗時不需要消毒藥片?
    氯對熱源沒有任何影響,因而不需要清洗UF膜。
    事實上,已經證明氫氧化鈉是一種能有效地去除菌膜和熱源的化學物質。
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    9.  如何控制純水系統中的微生物數量?
    在水箱中,運輸管路中純水的水質越高越好。
    要定時更換耗材(因為微生物極易在耗材表面滋生)。值得注意的是,10μ以下的各種filter及membrane都能捕捉微生物,但無法殺死微生物,可能會導致微生物泛濫,影響下有水質。  紫外燈務必要定期更換,以防止菌膜(biofilm)的生成。
    盡量讓純水系統工作4小時/天以上,系統應具備內部清洗(Flush),消毒,循環等功能,系統使用材料應為低化學溶出物,無死角且表面光滑。
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    純水應用常見問題
    2.1  純水應用
    1.  什么樣的水可以用于水栽培?
    水栽培是一種使用人造載體(沙,礫,礦毛絕緣纖維,泥煤苔、椰殼、鋸屑)將植物固定在營養液(含有肥料的水)的一種培育方式。水栽培植物的根沒有其他的支持物,  聚合系統是采用固體支撐物。水中含有過多地鈣,鎂元素(“總硬度”)會有嚴重不良影響。
    因而建議在水栽培中使用經過預處理,或純化的水。而氯不會在這個應用造成很大影響,因為其高揮發性,一碰到空氣就蒸發。當營養液輸送到根部的時候,氯已經揮發掉了。
    大體上,可以將室內培育用的水分為3大類
    ·  1 類水可滿足所有要求。
    · 2 類水可用于底土層或土壤, 但是不適合應用營養膜技術的作物。
    ·  3類水最差,甚至不能用于對鹽類敏感的作物。
    水質分類
    類別
    電導率(Ms/cm)
    鈉 (PPM)
    氯化物(PPM)
    硫酸鹽  (PPM)
    1
    0.5
    30
    50
    100
    2
    0.5 - 1.0
    30 - 60
    50 -  100
    100 - 200
    3
    1.0 - 1.5
    60 - 90
    100 - 150
    200 -  300
    有些水中的一些元素如鐵,鋅,鎂含量高,這種情況下,應考慮它們的影響。   應盡量避免水中有50ppm的鈉或者70ppm的氯,兩者一結合,濃度高達兩倍。不經過純化/過濾,不能往這種水中添加營養液。水質對植物根區的平衡很重要。植物的根系和生長基就像是去除多余元素和不溶解物的過濾器,  這些不溶解物常出現在源水中,營養級別低,能聚集大量元素,甚至達到中毒的水平。
    2.  溶離度試驗要求的水質如何?
    溶離度試驗是一種測試口服固體劑型中的活性成分的溶解性,旨在確認特定標準下口服固體劑型的質量,并防止明顯的生物個體差異性。
    用于溶離度試驗的水必須是USP級別的純水,同時需加入大量的緩沖液以模仿胃中的環境。
    3.  Elix 水是否可以用于植物組織培養方面的應用?
    “植物組織培養”是指利用各種技術讓植物碎片在試管中生長、發育。   這些植物碎片可以大到1/4寸的葉子,也可以小到一個細胞。成功的組織培養在于某種已分化的植物細胞回到為分化植物細胞,并分裂繁殖的能力。這常常出現在受傷的植物的傷口。  傷口邊緣的細胞開始分裂,形成未分化的細胞群(愈傷組織細胞)。  在組織培養中,刺激愈傷組織細胞形成幼芽和根。
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    總體上,這個過程包括用漂白粉對植物組織(根,莖,或者葉)進行消毒。用消毒水清洗這些組織,切成碎片,放置在培養基上。培養基包含有細胞分裂生長所需的所有礦物質、激素、維生素和糖類物質。  通過改變培養集中激素的數量和種類,愈傷組織細胞發育成幼芽和根。
    所需水質:去離子水/蒸餾水
    大多數的組織培養要求用蒸餾水。主要考慮到水的硬度(鈣,鎂含量)和細菌含量。
    因而,Elix  水也可以用于植物組織培養的培養基制備和組織清洗
    17
    2.2 超純水應用
    1.  低水質的水是怎樣影響電泳實驗的?
    在電泳實驗中,水用來配制用以進行樣品分離的凝膠體。由于RNA酶能夠破壞待分離的RNA,所以,用來制備凝膠的水當中無RNA酶污染是絕對關鍵的。
    另外,水還用來配制緩沖液。
    2.  我使用注射用水(WFI)(小于500ppb)來做HPLC分析。我對結果很滿意,我為什么要用低TOC含量的水?
    推薦的HPLC級水是低有機和無機污染物的水。流動相中的雜質,尤其是用于HPLC分析的純水中的雜質可能會導致幾個問題。在梯度運行中污染物會產生峰。這會導致峰的鑒定和量化困難。同時水中的污染物還能損壞柱子。當標準溶液用含有雜質的超純水配制時,樣品的鑒定和量化時就會不精確。
    大量的研究顯示了水質在HPLC分析中的重要性,  要獲得高質量的基線,高純水的儲存是不恰當的。越來越多靈敏的測試方法與水質緊密相連。
    3.  DEPC處理水是分子生物學應用中更好的選擇?
    不是!!
    RNA酶的活性能通過酶變性來抑制,方法有高壓滅菌;用DEPC使酶失活;通過超濾去除酶。
    DEPC  是一種抑制溶液中RNA酶活性的常用方法。當酶用DEPC處理后,組氨酸12用來與DEPC反應使之不能再與RNA發生反應。酶永久失活,但是并未從溶液中除掉。
    表:DEPC處理方法對水質的影響。

    TOC(ppb)
    電導率(μS/cm)
    DEPC處理水-BIO  101
    122800
    2.9
    無RNA酶水-Sigma
    361
    2.8
    RNA  制備水-TAKARA
    821
    2.1
    Milli-Q 水(用DEPC處理)
    15700
    3.4
    Milli-Q系統+  UF柱
    <15
    0.055
    DEPC水也許沒有RNA;但是其它污染物如離子和TOC含量高。眾所周知有機物能夠影響生物學實驗。另外,DEPC還可能致癌。
    4.Milli-Q  Biocel產水水質和DEPC水一樣好嗎?
    RNA酶的活性可通過酶變性來抑制,通過高壓滅菌,基于抑制劑如DEPC處理的酶失活,通過超濾直接除去酶。
    DEPC是一種常見的抑制溶液中RNA酶的方法。當酶用DEPC處理后,組氨酸12與DEPC反應使之不能再與RNA發生反應。酶永久失活,但是并未從溶液中除掉。
    超濾是唯一能從溶液中除掉RNA酶的方法。Mill-Q  Biocel用內置于ABS(acrylonitrile butadiene styrene  polymer)中的聚砜超濾膜來除去酶,ABS幾乎不會向溶液中釋放離子和有18機物,因此不會影響水質。在流速500mL/min下以兩個不同濃度(0.1ng/L,1ng/L)的RNA酶進行膜挑戰性實驗。結果顯示,所用的分子量為13000道爾頓的超濾柱能完全截留200L的濃度為0.1ng/L  RNA酶A,在1ng/L濃度時,在處理100L后,能夠檢測到顯著的RNA酶A。

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