5.細菌對HPLC相關應用有什么影響?
用含有細菌的水制備HPLC系統的流動相,會產生很多問題:
被色譜介質(指色譜柱——譯注)截留下來的細菌會增殖,造成阻塞。
細菌會附著在色譜微球表面,覆蓋住活性位點。
會造成洗脫時間發生變動。
截流下來的細菌代謝產生的有毒副產品會在分析過程中產生假峰,帶來錯誤的分析結果。
6.什么是內分泌干擾物?它會如何干擾分子生物學實驗應用?應如何去除?
內分泌干擾物是一種合成的化學試劑,當被注入生命機體的時候,它們會模擬或者阻斷荷爾蒙的作用,干擾機體的正常生物功能。通過改變荷爾蒙水平、阻止或者促進荷爾蒙的分泌或者改變荷爾蒙在機體內部傳遞的途徑,從而影響和干擾這些荷爾蒙所控制的生物功能。以人類內分泌干擾物而知名的化學試劑包括:二乙基乙烯雌酚(雌二醇)、二氧(雜)芑、PCBs、DDT和其他殺蟲劑。
如今,很多科學家都在研究內分泌干擾物對人類和其他動物早期發育可能發生的影響。比如正在進行的關于殺蟲劑(二氧芑、DDT、阿特拉津等等)對內分泌系統損傷的研究。在這類研究應用中,所有的實驗用品中不含內分泌干擾品至關重要。
雙酚A是用來合成環氧樹脂和聚碳酸酯塑料的單體,在不完全聚合或者塑料老化的時候會溶出,能夠模擬雌激素功能。
酞酸酯是一大類增塑劑分子的通稱,通過調整添加量可以改變材料的硬度,也是一種內分泌干擾物。
實驗室中使用的水純化系統也有可能通過以下三種方式釋放雙酚A或者酞酸酯,從而成為內分泌干擾物的污染源:原水中含有這些有機物;純水系統生產材料溶出;以及純化介質溶出。最早的Millipak是由聚碳酸酯制造的,會有雙酚A和酞酸酯這樣的內分泌干擾物溶出,新型的Millipak
Express則是由SAN材料制備,內分泌干擾物溶出量大大降低。
污染物
Millipak Durapore PVDF膜
Millipak Express PES膜
二氯甲烷
28
0.45
雙酚A
2.2
0.003
DEHP
0.04
0.04
GC-MS分析結果(單位:ppb) DEHP:聚二乙基己基間苯二酚
如果進一步需要無內分泌干擾物的實驗用水,可以購買EDS終端純化柱(貨號:CPSPEDS01)。這種EDS終端純化柱可以密封低溫保存3個月。
7.重金屬對細胞培養有什么影響?
答:很多實驗已經證明了重金屬和聚合芳烴(PAH)的細胞毒素影響
存在于空氣,水和土壤中的環境化學污染物在很多方面影響著人類。汽車廢氣的燃燒所才產生的PAHs,和香煙影響內分泌系統。很多重金屬會導致腎衰竭,而汞能移動到大腦導致神經衰弱。
在測試的12種重金屬(Al,Ge,Ca,Cu,Pb,Mg,Mn,鎳,錫,Zn,硒酸鹽和亞硒酸鹽)中有四種(Ca,Cu, 鎳和Zn)顯示了細胞毒性。即使只有1.5M的重金屬(Cd, Cu, Ni 和Zn),也能發現有細胞死亡。
因此,推薦使用無離子污染和無有機污染的水來做細胞培養。
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水質監測相關問題
1. 什么是Type III, Type II and Type I 水?
根據水中污染物的類型, 許多國際組織將水質分為3類:Type I 水,Type II水,Type III水。 參數規格如下:
ASTM (美國材料測試協會)
參數
Type I
Type II
Type III
電阻率最小值( MΩ.cm 補償到 25oC)
18.0
1.0
0.25
總有機碳 (ppb )
10
50
200
鈉, 最大值 ( ppb )
1
5
10
氯化物,最大值(ppb )
1
5
10
總硅, 最大值 (ppb )
3
3
500
最大細菌數 (cfu/mL)
10/1000mL
10/100 mL
100/10mL
熱源,內毒素 /mL
<0.03
<0.25
NA
CAP (美國病理學會) NCCLS (美國國家臨床檢驗標準協會)
參數
Type I
Type II
Type III
最大細菌數(cfu/mL)
10
1000
NS
pH
NS
NS
5.0-8.0
最小電阻率 ( MΩ.cm@250C)
10
1.0
0.1
最大硅酸鹽值 ( mg/L SiO2 )
0.05
0.1
0.1
顆粒
0.22m filter
NS
NS
有機污染物
活性炭
NS
NS
2.是否可以用Anatel A10 TOC檢測儀測試自來水中TOC含量?
不可以!
Anatel A10
TOC檢測器用紫外光氧化技術氧化TOC。這種技術需要相對純凈的水(至少5兆歐)。一定量的樣品在催化劑TiO2存在下被UV光氧化。然后比較最初的和最終的電導率,電導率之間的差異是由于UV氧化TOC引起的。通過復雜的運算法則使得電導率的測量能夠表達TOC的含量水平。
3.我的超純水系統顯示電阻率為18.2兆歐,但TOC卻超過200ppb,為什么?
答:無離子而有高TOC含量的超純水是可能存在的。這可以很明顯的從下面的實驗中看出:往水中加入糖,TOC的含量增加而水的電阻率并不變化。
電阻率是描述水中離子水平的一種參數,而TOC指的是可以氧化的有機物。當然,如果加
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入離子化的有機分子,如乙酸,或甲酸,也可以改變水的電阻率。
0 15 30 45 60 75 90 105 120 135 0 50 100 150 200 250 300 350 400 TOC RES Time (min) TOC (ppb) / Resistivity x 10 (MΩ.cm)
4.如何測量反滲透水的離子截流率?
離子截流率是產水中離子濃度和原水離子濃度之差與原水離子濃度的比值。
%截流率 = [ (Cf-Cp)/Cf] x 100
Cf = 原水濃度,Cp = 產水濃度
要想精確的測量截流百分比,需要在反滲透柱前后各安裝一個電導儀。前者測量原水的電導率,而后者(安裝在反滲透膜后面)則測量反滲透產水的電導率。
截流百分比的下降表明反滲透膜被污染了,建議此時適當的清洗或者更換反滲透柱。
5.在取樣檢測Elix產水中細菌的含量時,需要做什么準備工作?
檢查出水口是否放置在排水池中(通常情況下都會放置在這兒)。排水池最容易滋生細菌,并逆著排水的方向生長到出水口,從而污染所取的水樣。因此在取樣前需要用70%的酒精清洗出水口。
具體步驟如下:
用70%酒精消毒
取樣前放水1 L以上沖洗
使用手套
使用無菌型的吸量管等玻璃器皿
取樣點附近用燃氣火焰保護,防治空氣中的細菌污染水樣。
6.為什么超純(Milli-Q)水是酸性的?
超純(Milli-Q)水不含任何離子而且中性。但是一旦超純水暴露在空氣中,它的純度會迅速下降。即便僅僅是幾分鐘,pH值都會明顯的下降。這是因為空氣中的二氧化碳會與水反應生成碳酸。
碳酸電離釋放出來的氫離子(H+)會降低水的pH值。這種反應非常迅速,暴露在空氣中的超純水電阻率會在60分鐘內從18.2MΩ.cm下降到4MΩ.cm。因此我們始終提倡Milli-Q水隨制隨用,而不用容器貯存。
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resistivity (MΩ.cm)10-20-40204060 80 100 Time
7.如何測量超純水的pH值?
測量超純水的pH值需要特殊的條件。由于性質比較特別,超純水被稱為世界上最強力的溶劑。水的化學式是一個氧分子加兩個氫原子,無色無味。由于絕對的純水能夠溶解任何接觸到物質,因此它絕對的純度是不可能保持的。由于超純水沒有任何緩沖能力(即在溶解其他物質的同時保持自身的pH值),因此最微小的污染也會改變它的pH值。
純水是一種優良的絕緣體,因此在測量pH值的時候很難讓pH計的測量電極和參比電極之間導通。這樣在測量用的電極電路中產生極高的電阻,會使得測量的電信號噪聲變大,電極的反應變慢,并產生靜電雙電層(static
buildup)。這種靜電雙電層在純水流經塑料管路時很常見。它產生的電場會使得測量得到的電阻比實際值要大。這樣測量得到的pH數值是錯誤的。
測量超純水的pH計需要用特殊的電極,它接一個金屬的、接地的附件。通過接地,增大了整個電路的電容,從而降低了電信號噪聲。同時由于接地分流了電荷,使得測量信號的穩定時間增大,也在某種程度上降低了靜電雙電層的強度。電極的附件還包括凝膠裝填的參比電極或者流動的聯結點,這可以在測量pH值得時候快速的在連接點兩側建立電位平衡。流過聯結點的電解液偶爾會阻塞聯結點。將整個測量電路放置在配件旁邊,可以讓代測樣品的電荷釋放掉,從而保持測量電極承受的壓力穩定。這同樣能夠解決樣品被KCl電解液污染的問題。
8.二氧化碳對超純水的pH值有什么影響?
超純水(Milli-Q水)不含任何離子而且中性。但是一旦超純水暴露在空氣中,它的純度會迅速下降。即便僅僅是幾分鐘,pH值都會明顯的下降。這是因為空氣中的二氧化碳會與水反應生成碳酸。
resistivity (MΩ .cm) 10- 20- 4020406080100Time
CO2 + H2O = H2CO3
H2CO3 = H+ + HCO3-
HCO3- = H+ + CO32-
碳酸電離釋放出來的氫離子(H+)會降低水的pH值。這種反應非常迅速,暴露在空氣中的超純水電阻率會在60分鐘內從18.2MΩ.cm下降到4MΩ.cm。