非限制性體干細胞（unrestricted somatic stem cells，USSCs)的分離
臍血來源胚胎樣干細胞（cord blood-derived embryonic-like stem cells，CBEs)的分離
臍血來源多能前體細胞（cord blood-derived multipotent progenitor cells ,CB-MPCs)的分離
| 實驗方法原理 | |
|---|---|
| 實驗材料 | 臍帶血來源的MNCs(CB-MNCs) |
| 試劑、試劑盒 | 滅菌起始培養基 擴增培養基 0.05%的胰蛋白酶 含EDTA PBSA |
| 儀器、耗材 | T25培養瓶 |
| 實驗步驟 |
(a)制備和分離臍帶血來源的MNCs(CB-MNCs)。 (b)如果使用凍存的CB-MNCs,復蘇的細胞可以用于培養，不需要其他分離步驟。 (c)用起始培養基按5×106?7×106個細胞/mL濃度接種到T25的培養瓶中。 (d)將細胞在37℃，5% CO2的條件下培養，2?4周內每周一次更換培養基和細胞因子。 (e)形成USSC集落后，在擴增培養基中擴增細胞。 (f)將細胞在37℃,5% CO2的條件下培養。 (g)到達80%匯合后，用0.05%胰蛋白酶/EDTA消化細胞，并按1:3比例傳代，在相同培養條件下繼續培養。
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