| 實驗方法原理 | |
|---|---|
| 實驗材料 | MSCs |
| 試劑、試劑盒 | 無菌CCM PBSA 0.85%臺盼藍鹽溶液 胰蛋白酶 EDTA |
| 儀器、耗材 | 聚丙烯離心管 15 ml或50 ml 塑料組織培養皿 直徑15 cm 移液器槍頭 非滅菌結晶紫溶液 蒸餾水 改良的Neubauer血細胞計數器 移液器 |
| 實驗步驟 |
(a)進行MSCs收集和傳代。對懸液中的剩余細胞重新計數以確保準確性。 (b)用CCM制備濃度為1000個細胞/ml的MSCs懸液。 (d準備3個15 cm培養皿，每個加人25 ml預熱的新鮮CCM。 (d)向每個培養皿中加人100μL懸液（100個細胞），晃動培養皿使細胞分布均勻，在37℃，5% CO2環境下孵育3周。 (e)3周后，從CFU培養物中吸出培養基，用PBSA潤洗培養皿3次。 (f)每個培養皿中加人10 ml結晶紫溶液，室溫孵育5?10 min。 (g)吸出染液，用蒸餾水潤洗，直到背景被清除。 (h)計數每個培養皿中的集落數，取其平均值，計算貼壁率或“CFU潛能”（形成的CFU相對于接種個數的百分比）。培養良好的MSCs—般CFU潛能大于40%。
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