植物愈傷組織的培養

愈傷組織是指切取植物體的一部分，置于含有生長素和細胞分裂素的培養液中培養，誘導產生的無定形的組織團塊。愈傷組織培養不僅是一種植物快繁的新手段，同時也是植物改良，種質保存和有用化合物生產的理想途徑。

愈傷組織
 

一、無菌播種

(一)實踐目的

學習利用植物種子的胚軸進行愈傷組織培養的方法，主要是種子的無菌接種技術。

(二)實踐地點和時間

植物組培室

(三)實踐用具與材料

超凈工作臺、手術剪、槍狀鑷、酒精燈、酒精瓶、紗布、高壓滅菌鍋、電子天平、盛物籃、植物種子、70%酒精、0.1%升汞、ZT、2,4—D、大量元素、微量元素、瓊脂、蔗糖

(四)實踐內容

1、培養基制備

配制MS培養基：用大量元素、微量元素、維生素、鐵鹽配制，不加植物生長物質。

每升培養基加入30/L蔗糖、8g瓊脂，將pH值調節到5.8。

2、高壓滅菌

培養基入高壓鍋1.11-1.12Pa下穩壓滅菌23分鐘，制備無菌水，同樣高壓滅菌30分鐘，滅菌時將接種器械和紗布等放入高壓鍋一同滅菌。

3、無菌苗的制備

選擇健康飽滿的種子，流水下清洗干凈，置超凈工作臺上。無菌水沖洗2-3 次后，視材料情況，(較老較硬的種子)可剝離種皮后0.1%升汞滅菌，也可以(較嫩較軟的種子)先滅菌后再用器械無菌剝離種皮。

4、無菌播種

剝離種皮的種子用無菌水2-3次沖洗后，接種到已制備的MS培養基中，每瓶培養基接種一粒。做好標記，置于培養室光下培養，以后一周隨時觀察生長狀況。

5、清潔整理

清潔整理工作臺和組培室，并將器械等工具清洗整理好以備下次實訓使用。

二、胚軸接種

(一)實踐目的

在上次實踐基礎上進一步學習愈傷組織培養的胚軸切割轉接技術，加深對愈傷組織的理解。

(二)實踐地點和時間

植物組培室、建議4學時

(三)實踐用具與材料

超凈工作臺、手術剪、槍狀鑷、解剖刀或刀片、酒精燈、酒精瓶、紗布、高壓滅菌鍋、電子天平、盛物籃、記號筆。無菌播種已萌發青豆、無菌播種已萌發豌豆、大量元素、微量元素、維生素、鐵鹽、BA、2,4—D等母液。

(四)實踐步驟

1、制備培養基

為試驗觀察生長物質對愈傷組織的影響，加深理解，可做對比試驗，制備三種培養基

配方1 MS+0.1ml/LBA+0.5ml/L2.4—D

配方2 MS+0.5ml/LBA+0.1ml/L2.4—D

配方3 MS+0.5ml/LBA+0.5ml/L2.4—D

2、下胚軸的切割轉接

(1)進行超凈工作臺開啟紫外燈、風機，換鞋、穿工作服、清潔雙手等常規操作。檢查酒精燈、酒精瓶是否該加酒精。

(2)將上周無菌播種成活，已經萌芽的種子放入超凈工作臺，仔細觀察種子，把污染的淘汰掉。

(3)灼燒鑷子和解剖刀刀片，冷卻，注意不能傷手。

(4)用工具將萌發種子放入培養皿內濾紙上，看清楚的胚軸位置，用鑷子和解剖刀刀片等器械除去子葉和胚根，切割胚軸成5mm左右切段。

(5)將切割下來的胚軸移入新培養基內，做好標記，三種配方分別移入標記，放入培養室培養。

3、清潔整理

按常規清潔整理超凈工作臺和實驗室，注意超凈工作臺不能用酒精擦拭，地面可用洗衣粉拖地，接種室可進行甲醛加高錳酸鉀熏蒸，為以后的實驗作準備。