生化分析儀的校準

一個實驗室測定結果的可靠性是由其精密度、準確性及可比性所決定的，一般必需從下面幾方面著手。

一． 選好測定方法；
二． 購買質量過硬的試劑盒；
三． 要有質優的測試儀器；
四． 必需進行正確的校準；
五． 還要規范化操作；
六． 搞好過硬的室內質量控制；
七． 積極參加室間質評活動；
八． 還要有一支素質高的隊伍。

　　現就生化分析儀的校準問題提出個人看法。

　　一、 校準的重要性和必要性

　　首先必須明確生化分析儀不論如何先進，它還是一個比較器，它測試出來的標本結果是隨著標準限的設置不同而變化的。所以，在衛生部臨床檢驗中心擬定的“臨床實驗室（定量測定）室內質控工作指南”中明確指出“對測定標本的儀器一定要求進行校準，校準時要選擇合適的（配套的）標準品/校準品；如有可能，校準品應能溯源到參考方法或/和參考物質；對不同的分析項目要根據其特性確立各自的校準頻率。”這說明校準儀器是室內質控的重要部分，強調了校準工作的必要性和重要性，同時指出了校準的方法和要求。

　　二、 確立測定系統的概念

　　對于一個臨床檢測項目，如果所用方法的測定原理、試劑、儀器、校準品中任何一個不同，都可能得到不同的測定結果。因此，測定系統包括測定原理、試劑、儀器、校準品四要素。如果我們想要得到準確可靠的測定結果，而該結果又具有與國際、國內其他實驗室的可比性，應該自己建立一個標準測定系統。在全自動生化分析儀上使用配套的試劑和標準品，即日立7170使用寶靈曼的試劑和校準品（c.f.a.s），在貝克曼CX-7生化分析儀上使用貝克曼的試劑和校準品等。各儀器廠家均有自己的標準測定系統。對于校準品不能亂用，如絕對不能用貝克曼的校準品校準日立生化儀，同樣也不能用寶靈曼的校準品去校準貝克曼生化儀。

　　三、 校準品和質控品

　　校準品（Calibration materials）含有已知量的欲測物，用以校準該測定方法的數值，它與該方法及試劑、儀器是相關聯的。校準品的作用是為了減少或消除儀器、試劑等造成的系統誤差。因此最好為人血清基質，以減少基質效應造成的誤差。
質控品（Control materials）只用于和待測標本同時測定的，為了控制標本的測定誤差，因此要求保存時間十分穩定。前者是校準其值而后者是控制誤差用的。

　　四、 校準前準備

　　1 .了解燈泡已使用多久？檢查飄移是否合乎要求；

　　2． 檢查比色杯的清潔及磨損情況？必要時進行更換；

　　3． 用清潔劑泡洗管道

　　4． 測定儀器的精密度及線性是否達到儀器性能要求？

　　五、 定值質控血清是否可以校準儀器？

　　我們在相同條件下，同時用五個進口產品，每家兩種不同濃度的定值如TP、ALB、UREA、UA、ALP、GGT、CK、HBDH、LD、AMY等，在日立7170A上進行測定(用常規試劑)，詳見質控血清對部份常規測定項目（如T、ALB、UREA、Cr、UA、K、Na、Cl、AST、ALT）結果與靶值比較： 表 不同廠家定值質控對TP、ALB、、AST、ALP結果與靶值比較

　　* 從總蛋白結果來看RANBOX與Bio-Red 相差為6.45%，而寶靈曼與Bio-Red 較為接近；

　　* 從白蛋白結果分析，寶靈曼與Bio-Red相對相差5.75%，與總蛋白結果明顯不同。Bio-Red則與汽巴康寧比較接近。

　　* UREA結果中凡是高值均上不去，分析其原因很可能與我們采用試劑盒的質量有關，所以試劑盒的線性范圍理應成為選擇試劑盒的重要依據之一。但從低值結果分析，也有5%的偏差（Bio-Red與Human）

　　* AST與ALT測定值均低于靶值，這就涉及我們選用什么K值問題。

　　* ALP測定中RANDOX（-16.6%）與寶靈曼（2.7%）靶值之間竟相差19.3%，這可能涉及試劑盒選用緩沖液種類，PH值以及所用ε值等有關。

　　通過上述結果比較，說明不同廠家生產的定值質控血清靶值之間有的相差較大，提示我們決不能用定值質控血清代替校準品作校準用。

　　六、 校準方法

　　例如日立(Hitachi)系列您必須購買寶靈曼(Boehringer)的試劑及其校準的說明書設置參數，用c.f.a.s.校準血清進行校準，即可獲得各項目的校準K值，同時觀察一下各項目測定時反應進程圖，檢查各項目參數設置是否在最佳位置，如不在最佳位置應予以重新設置并測定。此時得到的K值即為準確的校準K值，然后測定待測的10至20份新鮮血清三次取其平均值，應該說此結果是用Hitachi-Boehringer檢測系統所獲的測定值。然后用此血清值校準其它測定系統。

表 日立7170、BM試劑連續四個月每天進行校正(n=81)K值的變化

七、 關于酶活性測定校準問題

　　有的主張不進行校準而采用固定K值，有的作者以為應該進行校準。酶活力計算公式如下：

　　酶活力（u/l）=△A/min×V×106/(ε×v×1) 令k=V×106/（ε×v；則酶活力（u/l）=△A/min×k

　　常用K值有以下幾種：

　　a) 理論K值：根據理論摩爾消光系數（ε）來計算，如NADH為6.22×103

　　b) 實測K值：由于儀器波長的精密及半寬度不同，而應根據實測ε值來設定K值

　　c) 廠家給的K值：廠家生產試劑盒說明書上提供的K值（有的廠家提供6.3×103）

　　d) 校準K值：通過校準物直接校準得到的K值

　　在日立7170A全自動生化分析儀上，可以得到幾種不同的酶K值，見下表 表 日立7170A全自動生化分析儀上用不同方法得到幾種酶的K值

注：1校準物為寶靈曼c.f.a.s，試劑也用寶靈曼的配套試劑。
　　 2括號內數字是該K值與理論K值相比的變化率
　　 以上摘自張克堅文章中

　　* 從上述K值中不難發現實測K值大于理論K值，這說明生化分析儀的測光系統還存在著一定誤差，如波長、半寬度及光徑等偏差，使儀器達不到理論上的最佳狀態；

　　* 校準K值與實測K值之間也存在一定的差距，即使指示物和儀器相同，其差異可能由試劑及校準品造成的；

　　* 作者認為最好使用校準K值，但必須由兩個先決條件：1必須使用配套的試劑；2必須使用配套的高質量的校準品，但校準K值應有其溯源性。

　　關于酶活標準品，歐洲標準局（BCR）和美國國家標準技術研究院（NIST）均發表了人血清基質的酶活性標準物，相信不久將會有公認的標準（校準）品問世。

　　八、 必須擬訂校準計劃（文件）

　　校準工作不是僅進行一次就可萬事無憂一勞永逸，而必須經常化。按照“臨床實驗室質量控制（QC）的要求（草案）”必須要求擬定校準計劃，其內容包括：

1．建立校準方法

⑴選擇合適（配套）的校準品，包括校準品數目、類型和濃度；

⑵如有可能校準品應溯源到參考方法或參考物質；

⑶確定校準的頻度。至少每六個月進行一次校準；

⑷如有下列情況發生時，必須進行校準

　　* 改變試劑的種類，或者批號更換了。如果實驗室能說明改變試劑批號并不影響結果的范圍，則可以不進行校準；

　　* 儀器或者檢驗系統進行一次大的預防性維護或者更換了重要部件，這些都有可能影響檢驗性能；

　　* 質控反映出異常的趨勢或偏移，或者超出了實驗室規定的接受限，采取一般性糾正措施后，不能識別和糾正問題時；

2．每個實驗室對每臺儀器必需要有校準計劃。 每次校準必須有詳情的記錄和分析。每次校準記錄必須保存備查。

摘自《中國醫療器械工作站》