原理
空氣中的CO2 可以溶解在水中形成碳酸，使得水溶液的pH值發生改變，當在一定溫度下達到平衡時，溶液的pH即有一確定的數值。在這種情況下，如果知道了溶液的pH值，即可計算空氣中CO2 的濃度；知道了光合作用前后空氣中CO2 濃度的變化，即可計算光合強度。本方法使得上述平衡關系在一密閉系統中建立，以排除外界環境的影響，用NaHCO3 稀溶液代替水，以供應光合作用中足夠的CO2 ，用比色法測定NaHCO3 溶液的pH值。
儀器藥品
量筒 移液管
容量瓶 半導體點溫計
反應瓶（選用容量15ml左右、厚薄均勻的小藥瓶，并配一特質夾子，將小瓶和玻片連在一起，如圖10）
0.001mol/L碳酸氫鈉
甲酚紅指示劑（配制方法見附表4）
比色標準液（見操作步驟）
操作步驟
1. ．比色標準液
先配置下列兩種溶液，再按下表比例配pH7─9配的硼酸緩沖溶液。
溶液a（0.05mol/L硼砂溶液）：稱取19.108g硼砂（Na2 B4 O7 ·1OH2 O）配成1000ml。
溶液b（0.2mol/L硼酸 0.05mol/LNaCl溶液）：稱取12.45g硼酸(H3 BO3 )及2.925g氯化鈉溶于水成1000ml，每10ml緩沖溶液中加甲酚紅指示劑0.3ml，分別裝在與反應瓶相同的小瓶中，作為比色標準。最好裝在自制木盒中（圖11）便于攜帶比色。
2．測定
(1)試驗開始和結束時反應液pH值的選擇；如果使光合作用在濕度20℃，氣相中的CO2 濃度開始時高于大氣（為0.05%），結束時接近大氣（為0.03%）的條件下進行，則可以通過計算并查對附表12，得知在密閉系統中平衡時如果要使氣相中CO2 濃度達到0.05%，則液相溶液的PH大約在7.7左右，要使氣相CO2 為0.03%，則液相的pH近似7.95。因此希望試驗開始時反應液的pH為7.7，結束時的反應液pH值升至7.95左右，或稍高些，如pH為8.1，則此時氣相的CO2 濃度已降至0.02%，低于大氣中的含量。如果環境溫度改變，則液相的pH要作相應的改變，才能使得氣相有同樣濃度的CO2 ，溫度每升高10℃，則溶液的pH值應降低0.05。
(2)反應液配制；取0.001mol/L NaHCO3 溶液50ml，倒入細口瓶中，加入甲酚紅指示劑1.5ml，搖勻，然后用移液管向溶液中吹氣，使pH為7.7（如達到pH7.6，則氣相CO2 濃度已高至0.07%左右），然后分裝于小反應瓶中，反應液約占小瓶體積1/10，將夾子夾緊，充分搖動，待顏色穩定后，記下反應液的pH值及液溫。
(3)選定葉片后，迅速將反應瓶夾在葉片上，手持夾子，使在原來條件下進行光合，正確記錄開始時間（至秒）。
(4)曝光3─6分鐘（曝光時間長短視光合強度而定，在約20℃時，希望作用后pH升至8.1左右），微開夾子，迅速抽出葉片，重行夾緊，正確記錄結束時間（至秒），充分搖動1─2分鐘，顏色穩定后，比色，記錄pH及液溫如前。
(5)抽動反應瓶上玻片，使黑紙遮住瓶口，充分搖動后比色記錄pH，然后于瓶外加上外糊白紙的黑紙套，夾于葉上測呼吸強度3─9分鐘。記錄pH及液溫如前。
(6)根據測量前后的液溫及pH變化，查附表12，算出反應瓶中CO2 增減量，然后用下列各式求光合及呼吸強度。
總光合強度=凈光合強度 呼吸強度
上述測定應重復3次，求其平均值，將結果填入下表。