chujun_hust:我現在已經篩選出高表達EGFP的細胞,我想測量細胞數量與GFP熒光強度的相互關系,我設計了一個方案:把不同個數的細胞接種到96孔板中(比如1X102~1X105個/ml),然后只利用倒置熒光顯微鏡測量出每孔的總熒光強度,不知道能不能測出來啊?????不知道怎么測啊?或者有沒有其它好方法啊?
schoman:還是用流式來測吧,比熒光顯微鏡方便,結果好。流式現在到處都是,而且又不需要特殊處理,只要消化處理成為單個核細胞就可以上機檢測了。可以準確的檢測出細胞的相對熒光強度。
lalal308:我現正在進行鈣火花的測定,由于設備原因而不能測定具體困難如下:
1、有關MRC-1024激光共聚焦顯微鏡進行鈣瞬時測定(即測定鈣火花)的具體方法、設備的使用參數。
2、哪有先進的激光共聚焦顯微鏡,能進行鈣火花的測定,并可以接受外來人員。
murong:據我所知,國內很多單位是買了激光共聚焦顯微鏡,而且一般都有對外服務業務,您最好說明一下自己是哪里的,那樣方便戰友為您提供有用的信息。
tgsslan:我要給某鏈霉菌用血球計數板計數,請問一定要用油鏡觀察嗎?沒有油鏡的情況下,用普通的物鏡可以嗎?
mutongfeige:對于真菌來說,用40倍物鏡進行計數應該夠了,但要注意將光線調暗一點,才好觀察。
yanghao:我覺得還是用油鏡好,因為用高倍鏡的話,不能清楚的分辯鏈霉菌,計數的話不準確且不能與其他的G-菌區別,如果要求不高的話當然也可以用40倍鏡。如果是霉菌還可以用美蘭簡單染色,我是學檢驗的,我試過很多。
roc7464112:不要用油鏡,用40倍就可以,但是要調好:燈光的亮度,彩虹光圈的大小,聚光鏡的位置,一般把新把彩虹光圈調到最大,再調整燈光的亮度和聚光鏡的位置,直至不太亮,再對焦,然后左手調光源大小,右手調聚光鏡的位置,直至刻度線和菌都能看清楚。有必要的話還有再調一下聚焦微調。
yxssdoctor:一定不能用油鏡,理由如下:當用鏡檢對微生物計數時,菌體較大的酵母菌或霉菌泡子應該采用血球計數板;一般細菌則采用彼得羅夫-霍澤細菌計數板。兩種計數板的原理和部件相同,只是細菌計數板較薄,應該使用油鏡觀察。而血球計數板較厚,不能使用油鏡。
celia_xl:最近我們系買了一臺CONFOCAL,我想現在有很多單位都已經使用了,所以我想這些同志能否談談CONFOCAL的用途,使用心得,讓大家也學習學習。
zxmshwo:根據我的印象,Confocal(激光共聚焦顯微鏡),又稱為細胞CT,主要是對細胞內部結構進行定量、定性觀察,和細胞內一些離子定量檢測。主要適用細胞培養。
NewCureSeeker:共焦點熒光顯微鏡與普通熒光顯微鏡相比,有以下優點:
1、Z軸上的分解能高。
(1)可觀察被染上熒光的物質在細胞里的分布:例如,是在細胞膜上還是在細胞核里。
(2)即使組織標本較厚,也可獲得鮮明的畫像。
(3)可了解組織的3D結構。
2、高畫質
(1)通過調節pin-hole,不但可提高Z軸上的分解能,也可提高X-Y軸上的分解能。
(2)可以在光學和電子兩個水平調節對比度,因此可以從低對比度組織標本,拍攝到高對比度的圖像。