要保證ELISA實驗效果的必備要求有高品質的試劑盒、良好的儀器、正確的操作,這兩點做好之后基本上就沒什么問題了。其中,還有一些注意事項和重點要求需要掌握。今天我們就來看看【ELISA試劑盒步驟】核心分析。
就拿洗滌來說。這步驟有著決定性的作用,分有浸泡式、流水沖洗式兩種,ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應為新鮮的和高質量的本公司要求使用的純化水電導率小于1.5μs/cm。
一、保溫
在建立ELISA方法作反應動力學研究時,實驗表明,兩次抗原抗體反應一般在37℃經1-2小時,產物的生成可達頂峰。為避免蒸發,板上應加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,反應板不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡。應注意溫育的溫度和時間應按規定力求準確。由于公司的試劑盒溫育是在空氣浴中完成,采用水浴會造成值偏高或花板。另外溫育中還有邊緣效應,邊上的值會偏高,建議為了客觀的判斷結果,將質控放在非邊緣位置。
二、基因工程抗原與合成肽抗原的區別
基因工程抗原是抗原基因在質粒載體中原核或真核表達的蛋白質抗原,多以大腸桿菌或酵母菌為表達系統。該類抗原與合成肽相比,分子量大。合成肽采用化學方法制備,由于工藝的局限,合成數量有限,只能達到數百個氨基酸;而利用基因工程制備的抗原,分子量更大。
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