小鼠雌激素（Estrogen）ELISA檢測試劑盒使用說明

小鼠 (Mouse) 雌激素 (Estrogen) ELISA 檢測試劑盒

試驗原理：

小鼠雌激素 (Estrogen) ELISA 檢測試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知Estrogen濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將Estrogen和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中Estrogen的濃度呈比例關系。

試劑盒內容及其配制

試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制

96/48人份酶標板 1塊板（96T） 半塊板（48T） 即用型

塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型

標準品：80ng/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說明書進行稀稀

空白對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型

標準品稀釋緩沖液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型

生物素標記的抗Estrogen抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型

親和鏈酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型

洗滌緩沖液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按說明書進行稀釋

底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型

底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型

終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型

標本稀釋液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml） 即用型

自備材料

1．蒸餾水。

2．加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3．振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性

1．避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2．實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作步驟

1．使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。

2．根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。

3．加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

4．甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

5．每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6．甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

7．每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8．取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。

9．在450nm波長處測定各孔的OD值。

局限

6號標準品以上的結果為非線性的，根據此標準曲線無法得到的結果。

試劑盒性能

1. 靈敏度：最小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。

2. 特異性：不與其它細胞因子反應。

3. 重復性：板內、板間變異系數均小于10%。

結果判斷與分析

1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的Estrogen標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的Estrogen含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值范圍：0-80ng/ml

4、敏感度： 0.1 ng/ml