ELISA試劑盒的固相載體

為比較不同固相在某一ELISA測定中的優劣，可應用如下的試驗：用其他免疫學測定方法選出一個典型的陽性標本和陰性標本，將它們進行一系列稀釋后，在不同的固相載體上按預定的ELISA操縱步驟進行測定，然后比較結果。ELISA試劑盒可作ELISA中載體的材料良多，最常用的是聚苯乙烯。在ELISA試劑盒中用作固相載體的小珠一般為直徑0.6cm的圓珠，表面經磨砂處理后吸附面積大大增加。在哪一種載體上陽性結果與陰性結果差別最大，這種載體就是這一ELISA測定項目的最合適的固相載體。ELISA試劑盒小珠的另一特點是更易于使洗滌徹底，使用特殊的洗滌器，使小珠在洗滌過程中動彈淋洗，其洗滌效果遠較板孔的浸泡式為好。常用的檢查方法為：以一定濃度的人IgG（一般為10ng/ml）包被ELISA板各孔，洗滌后每孔內加入適當稀釋度的酶標抗人IgG抗體，保溫后洗滌，加底物顯色，終止酶反應后，分別測每孔溶液的吸光度。以含鐵的磁性微粒作為ELISA固相載體，反應后用磁鐵的吸引進行分離，洗滌利便，試劑盒一般均配以特殊儀器。與聚苯乙烯類似的塑料是聚氯乙烯。所有單個讀數與全部讀數的均數之差，應小于10%。其長處是表面積極大，反應在懸液中進行，其速率與液相反應近似。良好的ELISA板應該是吸附機能好，空缺值低。

ELISA載體的外形主要有三種：微量滴定板、小珠和小試管。固相載體在ELISA測定過程中作為吸附劑和容器，不介入化學反應。板式及珠式ELISA的標本量一般為100-200ul，而小試管可根據需要加大反應體積，標本反應量的增加有助于試驗敏感性的進步。現在已有多種自動化儀器用于微量滴定板型的ELISA檢測，包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟，對操縱的尺度化極為有利。為便于作少量標本的檢測，有制成8聯孔條或12聯孔條的，放入座架后，ELISA試劑盒大小與尺度ELISA板相同。聚苯乙烯經射線照射后，其吸附機能特別是對免疫球蛋白的吸附機能增加，應用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多，但用于間接法測抗體時空缺值較大。也有應用聚苯乙烯膠乳或其他材料制成的微粒作為ELISA試劑盒固相載體的。聚氯乙烯對蛋白質的吸附機能比聚苯乙烯高，但空缺值也略高。聚苯乙烯ELISA板因為原料的不同和制作工藝的差別，各種產品的質量差異很大，因此，每一批號的ELISA板在使用前須事先檢查其機能。