高效液相色譜儀是在經典液相柱色譜儀的基礎上,引入了氣相色譜儀的理論,采用了高壓輸液泵、高效固定相、梯度洗脫技術和高靈敏度檢測器,具有高壓、高速、高效、高靈敏度、高選擇性和應用范圍廣等特點。高效液相色譜儀與氣相色譜儀的比較如下:
一、應用范圍:
1、氣相色譜儀:
(1)能氣化、熱穩定性好和沸點較低的樣品。
(2)高沸點、揮發性差、熱穩定性差、離子型和高聚物樣品不能檢測。
(3)只有15%~20%的有機物能用氣相色譜儀分析。
2、高效液相色譜儀:
(1)溶解后能制成溶液的樣品。
(2)分子量大、難氣化、熱穩定性差、高分子和離子型樣品及具有生理活性物質均可檢測。
(3)應用廣泛,占80%~85%的有機物。
二、流動相:
1、氣相色譜儀:
(1)流動相為氣體。
(2)流動相無毒,易處理。
(3)流動相與組分之間無親和作用,只與固定相互作用,不參與分配平衡過程。
2、高效液相色譜儀:
(1)流動相為液體。
(2)大多數流動相有毒。
(3)易污染環境。
(4)成本較高。
(5)流動相與組分之間有親和作用,提高了柱選擇性,改善分離度,對分離起很大作用。
(6)流動相種類較多,選擇余地大。
(7)流動相極性和PH值的選擇對分離起重要作用。
(8)可選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為流動相,增大分離選擇性。
三、固定相:
1、氣相色譜儀:種類多。
2、高效液相色譜儀:不如氣相色譜儀固定相種類多。
四、色譜柱:
1、氣相色譜儀:用毛細管柱可得到很高的柱效。
2、高效液相色譜儀:色譜柱不能很長,柱效不是很高。
五、選擇性:
1、氣相色譜儀:流動相不影響分配,一般靠改變固定相和色譜柱溫來改變選擇性。
2、高效液相色譜儀:主要靠改變流動相來改變選擇性。
六、檢測器:
1、氣相色譜儀:有很靈敏的選擇型檢測器,也有較靈敏的通用型檢測器。
2、高效液相色譜儀:有較靈敏的通用型檢測器。
七、操作溫度:
1、氣相色譜儀:加溫。
2、高效液相色譜儀:室溫。
八、運行和操作難度:
1、氣相色譜儀:容易。
2、高效液相色譜儀:比氣相色譜儀難一些。
九、儀器制造難度:
1、氣相色譜儀:難度較小。
2、高效液相色譜儀:難度較大。
十、樣品回收:
1、氣相色譜儀:破壞樣品,回收困難。
2、高效液相色譜儀:不破壞樣品,回收容易且可定量,適合大量制備。
十一、其它:
1、高效液相色譜儀能完成難度較高的分離。
氣相色譜儀流動相載氣是色譜惰性的,不參與分配平衡過程,組分與流動相之間無親和作用,只與固定相互作用。高效液相色譜儀流動相與組分之間有親和作用,提高了柱選擇性,改善分離度,對分離起很大作用。可選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為流動相,增大分離選擇性。通常在室溫下操作,有利于色譜分離條件的選擇。
2、凡是能用氣相色譜儀分析的樣品一般不用高效液相色譜儀。
氣相色譜儀更快,更靈敏,更方便,耗費低。
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