流式細胞儀血小板分析

一、流式細胞儀血小板分析應用范圍

1、通過分析信號傳遞、細胞骨架結構、顆粒釋放、糖蛋白構形、膜磷脂、與抗凝因子的結合和微粒形成，分析血小板活化，血小板對刺激物的反應性。

2、通過分析受激后表面結合蛋白觸發凝血鏈式反應和表面糖蛋白缺陷檢測，分析血小板止血功能的獲得性和遺傳性缺陷。

3、結合血小板大小，檢測血小板RNA含量，分析血小板成熟度，計數網織血小板。

4、發現血小板抗體，做定性和定量分析。

二、血小板分析的臨床應用

1、血小板活化導致的血栓前綜合癥：如糖尿病、非免疫性血小板活化。

2、血管缺陷導致的血小板活化：如動脈粥樣硬化、急性心肌梗塞、血管成型術、心臟移植

3、血小板糖蛋白的基因缺失，或血小板存儲缺陷導致的出血性疾病。

4、骨髓異常增生或骨髓發育不良、腎衰末期、血小板輸血或藥物副作用引起的血小板止血功能障礙。

5、血小板相關的抗凝治療的診斷監測。

6、由特發性血小板減少或藥物引發的血小板減少、惡性腫瘤骨髓轉移導致的血小板生成減少。

7、免疫性血小板減少、先兆子癇或膿毒癥造成的血小板生成增加；生長因子治療的骨髓反應狀況監測。

8、自身免疫和同種免疫造成的血小板減少癥。

三、流式細胞儀檢測全血中血小板功的優點

1、全血中血小板更接近生理狀態。

2、操作簡便，減少由于操作造成的血小板狀態改變（如血小板活化試驗）。

3、同時檢測血小板的多個標志物，結合FSC和SSC，評估多個參數，進行定量分析。

4、多采用血小板特異抗體CD41或CD61畫門，找出血小板，避免雜質碎片的干擾。

5、檢測血小板亞群靈敏度高。

6、用血量少。

7、無放射性污染。

四、全血樣本的制備

1、抽取抗凝全血：檢測血小板功能時，應使用標準化的抽血規程；做血小板活化試驗時，應盡量減少人為造成的血小板活化。

2、Falcon管中加取全血和適量直標熒光抗體，充分混勻，室溫避光處反應，通常放置15分鐘。

3、1%多聚甲醛固定樣本。

4、上機檢測。

五、質控標本

1、陰性對照（Isotype Control）：非特異熒光的強弱取決于抗體濃度、單克隆熒光抗體特異性和純度，應與試驗管抗體相對應。在多色分析時，同型對照應與其它抗體同時使用，以避免補償造成的誤差。
　　2、血小板體外活化試驗：使用正常人活化標本作為陽性質控；使用正常人未活化標本作為陰性質控。
　　3、血小板自身抗體檢測：使用含有已知血小板抗體的血清與血小板孵育，作為陽性質控；使用不含血小板抗體的血清與血小板孵育，作為陰性質控。
　　4、血小板表面抗原缺失：如巨血小板癥血小板表面CD42a/CD42b缺失，血小板無力癥血小板表面gpIIb/IIIa，即CD41/CD61缺失或異常。使用正常人標本做陽性對照，抗體的同型對照做陰性對照。

六、數據分析-設門

1、FSC-SSC點圖中找出血小板，缺點是血小板較小，不易通過大小將碎片或雜質完全分開。

2、從CD41或CD61-SSC點圖中畫出血小板門，由于特異性高，可以有效地去除碎片和雜質的干擾。