毛細管電泳儀常見問題解決方案:
一、無電泳峰:
1、檢查結果:沒有電流。
可能原因:毛細管堵塞或斷裂。
解決方案:用水沖洗毛細管,觀察是否有水流出。若無水流出,拆下卡盒檢查毛細管兩端和窗口是否斷裂。若毛細管沒斷裂,可用水反向高壓沖洗。緩沖液需過濾,將樣品過濾或離心去除其中的顆粒。
2、檢查結果:電流波動很大,甚至幾乎消失。
可能原因:緩沖液中有氣泡產生或區帶中樣品析出。
解決方案:將緩沖液超聲脫氣,如果還有此現象發生,則可能是區帶中樣品析出,可降低樣品濃度。對于在緩沖液中溶解度不高的樣品,需在緩沖液中加入添加劑。
3、檢查結果:電流初始值較小,后逐漸增大。
可能原因:樣品進樣量過大。
解決方案:減少進樣量。
4、檢查結果:電流正常。
可能原因:樣品濃度過低。
解決方案:使用高濃度樣品測試,如果無法解決則有可能是以下其它原因。
5、檢查結果:電流正常。
可能原因:檢測波長設置不正確。
解決方案:確認被分析物的特征吸收,檢查檢測波長設置。
6、檢查結果:電流正常。
可能原因:分離極性錯誤。
解決方案:對于蛋白質樣品,注意蛋白質在分離條件下其PI和所帶電荷。對于核酸樣品,通常條件下會帶負電荷。
7、檢查結果:電流正常。
可能原因:樣品在毛細管內壁吸附。
解決方案:對于蛋白質和核酸樣品,應盡量采用涂層毛細管、極端pH條件或動態涂層,防止樣品吸附。
8、檢查結果:電流正常。
可能原因:光學檢測器或光纖損壞。
解決方案:進行標準樣品測試,如果沒有對應結果出現,則可能存在硬件問題。
二、電泳峰拖尾:
1、可能原因:毛細管窗口未開或窗口位置不正。
解決方案:打開毛細管檢測窗口或調整窗口位置。
2、可能原因:樣品在毛細管內壁吸附。
解決方案:對于蛋白質和核酸樣品,應盡量采用涂層毛細管、極端pH 條件或動態涂層,防止樣品吸附。
三、電泳峰不對稱:
1、可能原因:毛細管入口切口不平齊。
解決方案:重新切割毛細管入口。
2、可能原因:緩沖溶液與樣品溶液電解率差別過大。
解決方案:采用緩沖液作為樣品溶劑。
四、電泳峰過寬:
1、檢查結果:降低樣品進樣量,有改善。
可能原因:樣品濃度太大。
解決方案:可降低樣品濃度或減少進樣量。
2、檢查結果:降低樣品進樣量,無改善。
可能原因:樣品本身性質不均一。
解決方案:此原因主要是針對蛋白質樣品,小分子樣品發生的概率較低。
五、遷移時間不穩定:
1、檢查結果:出峰時間不穩定且無規律。
可能原因:緩沖液與毛細管內壁平衡較慢。
解決方案:每次樣品運行之間避免用NaOH沖洗毛細管。
2、檢查結果:出峰時間依次后延。
可能原因:樣品中物質易在毛細管內壁吸附。
解決方案:首先在每次樣品運行之前用0.1N NaOH溶液短時間沖洗毛細管,觀察遷移時間能否重復。如果效果不佳,使用涂層毛細管或將樣品再次處理。
六、峰形和出峰時間不穩定:
1、檢查結果:更換緩沖液種類,峰形和出峰時間穩定。
可能原因:緩沖液不穩定、易電解或樣品在原緩沖液條件下不穩定。
解決方案:更換其它種類的緩沖液。
2、檢查結果:更換緩沖液種類,峰形和出峰時間仍不穩定。
可能原因:樣品中物質易在毛細管內壁吸附。
解決方案:采用涂層毛細管或對樣品進行前處理。
七、電流泄漏:
1、檢查結果:毛細管斷裂。
可能原因:毛細管內緩沖液流出,造成電流泄漏。
解決方案:更換毛細管,并用水清洗光纖頭和檢測窗口。
2、檢查結果:毛細管無斷裂。
可能原因:實驗環境濕度過大。
解決方案:使用抽濕機或空調。濕度過大時,可在儀器關閉時放置干燥劑,但儀器運行時一定要將干燥劑取出。
八、無法加氣壓:
1、檢查結果:更換后問題解決。
可能原因:瓶頸處有液體,導致瓶塞易滑。
解決方案:向瓶中裝液體時不要過滿,也不要沾濕瓶頸。
2、檢查結果:若瓶塞無問題,可先采用真空方式,若真空方式可使用,但壓力仍不可用。
可能原因:壓力系統存在問題。
解決方案:檢修。
九、遷移時間可重復,但峰面積重復性不好:
1、檢查結果:重新切割毛細管入口,問題解決。
可能原因:毛細管入口切口不平齊。
解決方案:重新切割毛細管入口。
2、檢查結果:重新切割毛細管入口,問題仍然存在。
可能原因:若電動進樣可保持重現,則壓力控制或氣路存在問題。
解決方案:檢修。
十、毛細管或電極易折斷:
1、可能原因:瓶蓋老化。
解決方案:換瓶蓋。
2、可能原因:電極不垂直。
解決方案:將電極拉直。
十一、冷卻液泄漏:
1、可能原因:卡盒內墊圈和卡子漏裝或裝錯順序。
解決方案:嚴格按安裝順序安裝。
2、可能原因:儀器內部管路密封不嚴。
解決方案:檢修。