精油檢測之高效液相色譜法和氣相色譜法的區別
應用范圍
氣相
由于分離性能好、靈敏度高、分析速度快、操作方便等技術條件的限制,用氣相色譜法分析沸點過高或熱穩定性差的物質比較困難一般情況下,500℃以下不易揮發或易分解的部分可采用衍生法或裂解法。
液相
高效液相色譜法,只要求試樣能制成溶液,而不需要氣化,因此,不受試樣揮發性的限制對于高沸點、熱穩定性差、相對分子量大大于400以上的有機物(些物質幾乎占有機物總數的75%~80%)原則上,都可應用高效液相色譜法來進行分離、分析據統計,在已知化合物中能用氣相色譜分析的約占20%,而能用液相色譜分析的約占70~80%。
精油檢測之高效液相色譜法和氣相色譜法的區別
氣相儀器構造
氣相
由載氣源、進樣部分、色譜柱、柱溫箱、檢測器和數據處理系統組成進樣部分、色譜柱和檢測器的溫度均在控制狀態。
1. 柱箱:
色譜柱是氣相色譜儀的核心,樣品中的組分在色譜柱中重復分布后被分離,所以分析的目的是安裝色譜柱由于色譜柱的兩端分別與進樣器和檢測器相連,進樣器和檢測器的下端(接頭)插入柱盒柱箱可安裝各種填料柱和毛細管柱,柱(樣)需要在一定的溫度條件下工作,柱箱的溫度由微機控制,柱箱內的梯度較小,設計合理。
對于某些成分復雜、沸點范圍寬的樣品,柱盒也可用于三級溫度程序控制。且程序設置完成后,自動運行無需人工干預,冷卻時也可自動開門排熱..
2. 進樣器:
注射器的作用是將樣品送入色譜柱對于液體樣品,噴射器也必須蒸發。因此,采用微機控制噴油器的溫度。
根據色譜柱的不同和進樣方法的不同,有五種注射器可供選擇:
填充柱進樣器
毛細管不分流進樣器附件
毛細管分流進樣器附件
毛細管分流/不分流進樣器
六通閥氣體進樣器
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3. 檢測器:
檢測器的作用是將樣品的化學信號轉化為物理信號(電信號)檢測器也需要在一定的溫度條件下才能正常工作,因此采用微機對檢測器進行溫度控制。
根據各種樣品的化學和物理性質,有五種檢測器可供選擇:
氫火焰離子化檢測器(FID);
熱導檢測器(TCD);
電子捕獲檢測器(ECD);
氮磷檢測器(NPD);
火焰光度檢測器(FPD);
4. 數據處理系統:
該系統能夠對測試數據進行采集、存儲、顯示、打印和處理,從而正確地進行樣品的分離、制備和鑒定。
高效液相儀器構造
液相
高效液相色譜儀主要由注射系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統組成。
1. 進樣系統
一般使用:膜片噴油器或高壓噴射之間完成注射操作,取樣量是恒定的。有利于提高分析樣品的重復性。
2. 輸液系統
該系統包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分高壓泵的一般壓強為l.47~4.4×107Pa流速可調且穩定,當高壓流動相通過層析柱時,可降低樣品在柱中的擴散效應,可加快其在柱中的移動速度,這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的流動相貯存錯和梯度儀,可使流動相隨固定相和樣品的性質而改變,包括改變洗脫液的極性、離子強度、pH值或改用。
精油理化指標檢測之高效液相色譜法和氣相色譜法的區別
3. 分離系統
該系統包括色譜柱、連接噴嘴和恒溫器。
當色譜柱長度一般為10-50cm,需要同時使用兩個色譜柱時,可在兩個色譜柱之間加一個內徑為2-5M的連接管,連接管采用優質不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成。柱上設有直徑為5-10μm的固定相,由基體和固定液組成。固定相中的基質是由高機械強度的樹脂或硅膠制成,它們與硅膠表面一樣惰性,此外,硅酸基因的表面已被機械涂覆,這與氣相色譜固定相的制備相同,或與不同長度碳鏈或配體的磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或烷基等多種基因化學偶聯的有機化合物。
因此,具有不同固定相對結構的這類物質具有良好的選擇性如在多孔硅膠表面偶聯豌豆凝集素PSA可以分離成纖維細胞中的糖蛋白。
另外,固定相質粒體積小,柱床容易達到均勻致密狀態,容易降低渦流擴散效應基質的粒徑小,微孔淺,樣品在微孔區域的傳質短這有利于減小帶寬,提高分辨率。根據塔效理論分析,基體尺寸越小,理論塔板數n越大。
進一步證明,當基體顆粒尺寸較小時,分辨率會得到提高。此外,高效液相色譜(HPLC)的恒溫器可以將溫度從室溫調節到60℃。通過提高傳質速率和縮短分析時間,可以提高色譜柱的效率。
4. 檢測系統
高效液相色譜中常用的檢測器有三種:紫外檢測器、差折射檢測器和熒光檢測器
(1)紫外檢測器
檢測器適合于檢測紫外(或可見)吸收樣品。
其特點:應用范圍廣如蛋白質、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等;
靈敏度高檢測下限為10-10g/ml;
線性范圍寬;對溫度和流速變化不敏感;能檢測梯度溶液洗脫的樣品。
(2)示差折光檢測器
通過差分折射率檢測器可以檢測出來自流動相的任何不同折射率的樣品,該檢測系統可用于碳水化合物的檢測。該系統通用性強,操作方便,但靈敏度低(檢測限為10-7g/ml)。流動相的變化會引起折射率的變化。因此,不適合痕量分析或梯度洗脫樣品檢測。
(3)熒光檢測器
對于具有熒光的物質,發射光的熒光強度與在某些條件下的物質的濃度成比例。因此,本檢測器僅適用于有機化合物如多環芳烴、氨基酸、胺、維生素和某些蛋白質等的熒光測定其靈敏度高檢測限為10-12-10-14g/ml,可用于痕量分析和梯度洗脫。
精油理化指標檢測之高效液相色譜法和氣相色譜法的區別
5.數據處理系統
該系統能夠對測試數據進行采集、存儲、顯示、打印和處理,從而正確地進行樣品的分離、制備和鑒定。
高效液相色譜與氣相色譜法
優點和不足分析
不經化學處理,氣相色譜法只能分離出20%的樣品,而高效液相色譜法能分析出80%的有機物。
氣相色譜中的流動相是惰性的,它對組分沒有作用力,只起載體的作用,而高效液相色譜(HPLC)的流動相不僅是載體,而且對組分也有一定的親和力,可以通過改變流動相的類型和組成來提高分離的選擇性。此外,還有許多化合物可以作為流動相使用,而且選擇范圍很廣。
與氣相色譜法相比,高效液相色譜法的另一個優點是樣品的回收相對容易。只要將打開的容器放在柱的末端,就可以很容易地收集分離的組件回收率是定量的,可以用于提純和制備純度足夠的單一物質。
近年來,檢測器的靈敏度不如氣相色譜法必須特別注意“柱外效應”對柱效率和色譜分離的影響。